[发明专利]一种诱导番茄耐热性的方法

说明书

一、技术领域：

本发明涉及诱导番茄耐热性的方法，具体是一种利用高温诱导的番茄促分裂原蛋白基因LeMPK基因可以提高番茄对高温的耐受性的规律，通过在番茄植株体内表达LeMPK基因从而提高番茄对高温的耐受性，表达该基因的方法采用的是利用病毒表达载体PVX来进行瞬时表达，具有简单、快捷的特点。

二、背景技术：

番茄原产于南℃美西部高原地带，是对温度较为敏感的喜温植物，适宜的生长温度为15～32℃，开花坐果最适温度为25℃左右，过高或过低均会影响其正常的生长发育。番茄在我国蔬菜栽培中占有重要的地位，是生产上的大宗蔬菜之一。然而，随着温室效应的加剧，全球气温不断升高，生产上面临着高温胁迫的严峻挑战。夏季栽培番茄或晚春、早秋的保护地生产中易出现异常高温，特别是我国南方地区，已成为限制番茄生产的主要原因之一。研究发现，高温会降低番茄种子活力，甚至完全抑制种子的萌发；高温会导致抗氧化系统失衡，并能破坏叶绿体膜结构，通过非气孔因素影响光合作用，从而严重影响番茄的产量和品质。多年来，很多学者专家均致力于克服高温对番茄生产造成的影响，其中培育耐性品种是最主要的方法之一。因此，提高番茄对高温的耐受性具有重要的现实意义。

三、发明内容：

本发明提出一种通过利用病毒表达载体(PVX载体)在番茄植株体内表达促分裂原蛋白基因LeMPK基因从而诱导番茄对高温的耐受性的方法。

本发明是这样实现的：利用PVX载体在番茄体内表达耐热相关基因LeMPK而诱导番茄对病毒产生抗性，根据已经报道的LeMPK基因组序列，利用生物信息学软件(DNAStar，Madison，WI，USA)分析其序列，设计引物，以番茄叶片总DNA为模板，扩增克隆该基因。将该基因序列克隆至病毒载体PVX中，构建表达LeMPK基因的病毒，利用电击法将该载体导入农杆菌EHA105，浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片，从而使番茄获得耐热性。采用本发明的方法，可以快速使番茄获得对高温的耐受性，大大节约了传统育种的成本。

本发明的有益效果是：这种方法可以快速使番茄获得对高温的耐受性，省去传统育种多代杂交选育的过程，节省了劳动力，降低成本。

四、具体实施方式：

1.病毒序列的选择与克隆

根据已经报道的番茄体内表达耐热相关基因LeMPK基因组序列，利用生物信息学软件(DNAStar，Madison，WI，USA)分析寻找其保守区段，设计引物，以番茄叶片总DNA为模板，扩增克隆目的保守片段。

2.病毒表达载体构建

将LeMPK基因组序列片段克隆至病毒表达载体PVX中，构建基于病毒作为载体的表达LeMPK基因的植物表达载体，利用电击法导入农杆菌EHA105。

3病毒载体的接种

将农杆菌在平板培养基上划线培养，挑取单菌落用液体培养基振荡培养至OD值0.6～1.0，利用注射器注射浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片，番茄苗岭控制在3～4片真叶期。