[发明专利]具有血管化能力的组织工程骨及其制备方法

权利要求书

1.一种具有血管化能力的组织工程骨的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A1，VEGF、Ang-1基因质粒的获取及扩增、纯化；

A2，VEGF、Ang-1基因质粒与I型胶原混合溶液的制备；具体方法为：I型胶原蛋白粉末置于0.2mol/L醋酸溶液中，PH＝3.2，配成0.3wt％的I型胶原溶液，4℃中充分搅拌12h，以使其充分溶解；然后将得到的VEGF、Ang-1的质粒与I型胶原溶液混合，质粒浓度按照各20ug/ml配制；

A3，将上述获得的支架材料在真空环境下置于所述的I型胶原混合溶液中抽吸4h，使原始支架孔洞中充分浸入I型胶原溶液；混合物于-80℃冷冻12h后，在真空冻干机中冻干48-72h以使孔洞中形成胶原海绵结构；37℃下用1％戊二醛溶液对胶原海绵结构进行交联10min；用去离子水反复洗涤后置于冻干机中冻干，构建成具有双基因修饰的新型人工骨。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A1中，扩增VEGF所用引物对为：

Primer1：GGAAGATCTATGAACTTTCTGCTGTCT；

Primer2：ACGCGTCGACCCGCCTCGGCTTGTCACA；

上游引物Primer1引入Bgl II位点，下游引物Primer2引入Sal I位点。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A1中，扩增Ang-1基因所用引物对为：首轮PCR引物：

primer3：AGAGGTCAGAAGAAAGGAGCAA；

primer4：GCCCGACAGTCAGTGGAGT；

第二轮PCR引物：

primer5：ATGACAGTTTTCCTTTCCTTTGC；

primer6：TCAAAAATCTAAAGGTCGAATCATC。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法制备的具有血管化能力的组织工程骨。