[发明专利]与大豆抗疫霉根腐病候选基因RpsWD15-2共分离的分子标记及其应用

权利要求书

1.与大豆抗疫霉根腐病候选基因RpsWD15-2共分离的分子标记，其特征在于，所述候选基因RpsWD15-2位于大豆第17号染色体上，且位于标记Sattwd15-24/25和Sattwd15-47之间，与这两个标记的遗传距离分别为0.5cM和0.8cM；

所述分子标记为Sattwd15-32，含重复基序(AAC)6，且用于扩增分子标记Sattwd15-32的特异性PCR引物对为：

上游引物F：5′-ATCCCTTATTCCCTTCAT-3′和

下游引物R：5′-CATAGACCTCCTTCCAAA-3′。

2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，PCR扩增使用的退火温度为47℃，扩增产物大小为149bp。

3.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述候选基因RpsWD15-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.用于检测与大豆抗疫霉根腐病候选基因RpsWD15-2共分离的分子标记Sattwd15-32的PCR引物对，其特征在于，包括：

上游引物F：5′-ATCCCTTATTCCCTTCAT-3′和

下游引物R：5′-CATAGACCTCCTTCCAAA-3′。

5.权利要求1所述与大豆抗疫霉根腐病候选基因RpsWD15-2共分离的分子标记在鉴定抗疫霉根腐病大豆品种中的应用，其包括步骤：

1）提取待测大豆的基因组DNA；

2）以待测大豆的基因组DNA为模板，利用权利要求4所述引物F和R，进行PCR扩增反应；

3）检测PCR扩增产物，如果能够扩增出149bp的产物，则判定为抗疫霉根腐病大豆品种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2）中PCR反应使用的扩增体系以20μl计为：大豆基因组DNA模板浓度2ng/μL，10×PCR缓冲液2.5μl，四种dNTP浓度各为20μmol/L，上、下游引物浓度各为0.2μmol/L，Taq DNA聚合酶0.5U，用ddH₂O补足至20μl。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2）中PCR反应使用的条件为：95℃3分钟；94℃50秒，47℃50秒，72℃50秒，35个循环；72℃10分钟。

8.含有权利要求4所述引物对的用于检测抗疫霉根腐病大豆的试剂盒。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液、标准阳性模板中的一种或多种。

10.权利要求1所述与大豆抗疫霉根腐病候选基因RpsWD15-2共分离的分子标记在大豆抗疫霉根腐病分子育种中的应用。