[发明专利]一种与中国荷斯坦奶牛产奶性状及体细胞评分相关的SNP标记及其应用

权利要求书

1.一种用于检测中国荷斯坦奶牛产奶性状及体细胞评分的核酸片段，其特征在于，该核酸片段的序列如SEQ ID NO.1所示，第197bp位点处的碱基为G或A。

2.一种与中国荷斯坦奶牛产奶性状及体细胞评分相关的SNP标记,所述SNP标记位于中国荷斯坦奶牛HAL基因如SEQ ID NO.1所示序列的197bp位点处，此处位点的碱基为G。

3.用于检测权利要求2所述的SNP标记的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有正向引物F：5’-GGCAACTACCTGAACCAA-3’和反向引物R：5’-CACCACCCTGTCAATCAA-3’。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺和PCR反应缓冲液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

6.权利要求2所述的SNP标记在鉴定乳蛋白量高、体细胞评分低的中国荷斯坦奶牛优势品种中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测中国荷斯坦奶牛的基因组DNA；

（2）以待测中国荷斯坦奶牛的基因组DNA为模版，利用引物F和R，通过PCR反应扩增出中国荷斯坦奶牛HAL基因307bp片段，其中，

F:5’-GGCAACTACCTGAACCAA-3’

R:5’-CACCACCCTGTCAATCAA-3’；

（3）检测PCR扩增产物，如果扩增产物序列中197bp处的碱基为G，则待测中国荷斯坦奶牛属于乳蛋白量高、体细胞评分低的中国荷斯坦奶牛优势品种。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤（2）中PCR反应使用的扩增体系以25μl计为：50-100ng/μl模板DNA 1μl，10pmol/μl引物F和R各1μl，10mmol/L dNTP mix2.0μl，5U/μl TaqDNA聚合酶0.125μl，10×PCR反应缓冲液2.5μl，余量为双蒸水；

F：5’-GGCAACTACCTGAACCAA-3’

R：5’-CACCACCCTGTCAATCAA-3’；

PCR反应的条件为：94℃5分钟；94℃30秒，52℃30秒，72℃35秒，34个循环；72℃10分钟。

9.权利要求2所述的SNP标记在中国荷斯坦奶牛分子标记辅助育种中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）采用聚合酶链式反应和测序技术筛选到与中国荷斯坦奶牛产奶性状及体细胞评分相关的SNP标记；

（2）通过飞行时间质谱方法来检测待测中国荷斯坦奶牛的基因型；

（3）根据基因型进行乳蛋白量高、体细胞评分低的中国荷斯坦奶牛优势品种的选育。