[发明专利]一种金耳发酵美白液的制备方法

权利要求书

1.一种金耳发酵美白液的制备方法，其特征在于：外观为淡黄色液体，是金耳通过深层发酵获得的发酵液经过浓缩，脱蛋白，透析后再加入VC磷酸酯，透明质酸和蒸馏水，滤过除菌后制得；其中发酵液所含氨基酸中甘氨酸占38％以上，缬氨酸占9％以上，苯丙氨酸占7％以上，酪氨酸占7％以上，亮氨酸占6％以上；

所述的美白液的制备方法，步骤如下：

(1)菌种培养

出发菌种为实验室斜面保藏菌种；

①摇瓶种子培养

(1)摇瓶种子培养

摇瓶种子培养基：PDA1L加磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0；

培养方法：从活化的斜面菌种中取3～4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基100mL于25℃，120r/min，振荡培养7d；

(2)摇瓶发酵培养

发酵培养基：葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氢钾0.2g/100mL、硫酸镁0.05g/100mL；

培养方法：将培养好的种子以15％的接种量接入摇瓶发酵培养基中25℃，120r/min，振荡培养7d；

(3)发酵液浓缩，脱蛋白，透析

培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，即按发酵液1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡过夜后4000rpm离心20min，收集上清液，反复操作5次至氯仿-正丁醇层不浑浊为止。然后取上清液中装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析72h，中间每隔12小时换水一次，得发酵液；

(2)发酵液浓缩，脱蛋白，透析

培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，然后取上清液透析；

(3)其他组分的添加及滤过除菌

①其他组分的添加

发酵液浓缩后加入VC磷酸酯、透明质酸和蒸馏水；

取浓缩后的发酵液60g-80g，加入VC磷酸酯5g-8g；透明质酸0.1g-0.5g；蒸馏水补足100mL；

②滤过除菌

上述液体通过0.22μm的滤膜除菌。

2.如权利要求1所述的一种金耳发酵美白液的制备方法，其特征在于：所述用Sevage法去除游离蛋白，是按发酵液1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡过夜后4000rpm离心20min，收集上清液，反复操作5次至氯仿-正丁醇层不浑浊为止。

3.如权利要求1所述的一种金耳发酵美白液的制备方法，其特征在于所述的透析是指将去除游离蛋白质的发酵液装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析72h，中间每隔12小时换水一次。