[发明专利]一种间充质干细胞注射液及其制备方法和在制备治疗儿童扩张型心肌病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种间充质干细胞注射液及其制备方法和在制备治疗儿童扩张型心肌病药物中的应用。

背景技术

扩张型心肌病是一侧或双侧心腔扩大并伴有心肌肥厚，心肌收缩期泵血功能障碍，产生充血性心力衰竭。本型的特征为左或右心室或双侧心室扩大，并伴有心肌肥厚。心室收缩功能减退，伴或不伴充血性心力衰竭。病情呈进行性加重，死亡可发生于疾病的任何阶段。室性或房性心律失常多见，为首见或主要的表现，并有多种心律失常合并存在而构成比较复杂的心律，可以反复发生。高度房室传导阻滞、心室颤动、窦房阻滞或暂停可导致阿-斯综合征，成为致死原因之一，此外，尚可有脑、肾、肺等处的栓塞。目前的药物治疗或心脏移植不能很好的改善患者的病情及死亡率。干细胞技术的发展为此疾病的治疗带来了希望。

儿童扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy,DCM）是一类原因不明的心肌疾病，国内其发病率约为84/10万人。DCM的病程呈进行性，预后极差，严重危害儿童健康，其1年的存活率为60%～90%，5年的存活率为20%～80%。目前，DCM仍无特效治疗，基础药物包括洋地黄、利尿剂、血管扩张剂、神经内分泌阻滞剂，生长激素、大剂量免疫球蛋白等在内的治疗措施虽可改善部分DCM患儿的预后，但仍不能从根本上解决问题。在世界各地所作的心脏移植病例中，DCM病人约占44%；虽然有研究者认为左室减容术可明显提高左心室功能，但其住院死亡率仍高达10～20%，其2年生存率仅为60%；几乎50%的有症状的儿童心肌病患者需要接受心脏移植或在2年内死亡。因此，创新性探索儿童DCM治疗的新方法，对改善儿童DCM的预后具有重要的临床意义。

目前儿童扩张型心肌病的治疗主要解决的是防治心律失常和心功能不全，以及对症支持治疗，不能从根本上治疗疾病，患者需服用大量纠正心律失常及维护心脏功能的药物，日常活动严格受限，在此情况下病情仍然容易加重，疲劳、受凉、感染等诱因下很容易发生心力衰竭，危及患者生命。目前的药物与手术治疗并不能很好的避免这些情况的发生，改变患者扩大的心脏，恢复正常心脏结构才是治疗扩张型心肌病的根本。

理论上，胚胎干细胞和诱导的多能分化干细胞是儿童心肌病患者细胞性心肌成形术的理想种子细胞；但前者的来源有限，且可能存在伦理学问题；而后者在培养过程中需要添加的诱导物质以及培养液本身对种子细胞以及对心肌细胞的作用尚未明确，因此大大限制了其临床应用，多限于动物实验研究。间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一类具有自我更新能力的多能分化干细胞，分布在骨髓、脐带、胎盘和成人的许多其他组织中。可分化为多种细胞，如骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞和肌腱细胞。因此，MSCs被称为通用捐献细胞。近年来，应用骨髓间充质干细胞移植修复受损心肌成为国内外研究的热点；研究证实间充质干细胞可以抑制心肌内的炎症反应、抑制心肌细胞的凋亡、刺激心肌内血管新生；在DCM动物模型中有明显的治疗效果，在临床研究中显示间充质干细胞治疗早期可明显改善成人DCM的心室功能。但骨髓间充质干细胞的来源有限，获取途径具有创伤性；且随年龄的增长，骨髓中有分化潜能的间充质干细胞逐渐减少；另外，诱导后的骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的效率较低。对儿童来说抽取骨髓极不方便，儿童本人和家长接受度不高，同时小儿骨髓的抽取量较少。

后来研究者相继发现脐带组织和胎盘中含有丰富的间充质干细胞，且经诱导后可分化为神经细胞、成骨细胞、脂肪细胞以及心肌细胞等。Yoo等比较了来源于成人骨髓、睾丸组织和脐带组织的MSCs的免疫调节作用，发现它们的免疫抑制作用和分泌因子基本一致，认为来源于脐带组织的间充质干细胞可作为骨髓来源的MSCs的替代者用于同种异体干细胞治疗。脐带MSCs具有低免疫原性和独特的免疫调节作用，能调节体内过激或较弱的免疫反应，减少自身异常免疫反应对自身组织而破坏。胎盘、脐带来源的MSCs具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、无道德伦理问题的限制、易于工业化制备等特征，使其有可能成为用于组织修复、免疫紊乱的调节和代谢性疾病细胞治疗最具临床应用前景的多能干细胞。