[发明专利]环氧化物水解酶基因、编码酶、载体、工程菌及应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种从壤霉菌ZJB120203中提取的环氧化物水解酶基因、编码酶、载体、工程菌及应用。 

（二）背景技术

环氧化物水解酶（EC 3.3.2.3）是一组功能相似的酶系，能够立体选择性催化环氧化合物生成光学活性的环氧化物和相应邻位二醇。作为一种水解酶它具有一般水解酶的特点如：1. 反应不需要辅酶的协助。2. 具有广泛的来源。3. 在非水溶剂中仍具有催化活力。4. 这些反应常常显示出化学、区域和立体对映选择性，能够对同类型广泛的底物进行作用。 

环氧化物水解酶广泛存在于自然界中，在哺乳动物、昆虫、微生物和植物中均有发现。哺乳动物环氧化物水解酶参与了体内有害异体物质的代谢，并有调控血压等功能；植物环氧化物水解酶能参与角质以及抗菌物质的合成；昆虫环氧化物水解酶具有分解代谢昆虫发育过程中重要的化合中间体保幼激素以及代谢植物释放的化学预防化合物的重要功能；而微生物是环氧化物水解酶的重要的来源。由于微生物种类的多样性、生长速度快、易于培养和产量高等优点，从微生物中筛选获得环氧化物水解酶是目前主要的途径。 

近年，已从多种微生物中发现了环氧化物水解酶，如Rhodococcus equi，Rhodococcus ruber，Mycoplana rubra ，Bacillus megaterium, Diplodia gossipina，Streptomyces striana, Rhodotorula glutinis, Bacillus subtilis, Sphingomonas echinoides ，Rhodotorula araucariae，Rhodosporidium toruloides，Agrobacterium radiobacter，Mycobacter tuberculosis，Aspergillus niger，Caulobacter crescentus，Trichosporon loubierii，Sphingomonas sp， Novosphingobium aromaticivorans，Saccharomyces cerevisiae等。其中部分环氧化物水解酶的基因已被克隆并在不同的宿主（大肠杆菌、毕赤酵母、耶氏酵母等）中表达，获得产酶活力较高的基因工程菌，并应用于不对称拆分外消旋环氧化物。另外，在手性环氧氯丙烷的制备和手性苯基环氧乙烷中也有广泛应用。 

手性环氧氯丙烷和手性苯基环氧乙烷在医药、农药、化工、材料等领域应用广泛。随着手性药物行业的发展，使得手性环氧氯丙烷和苯基环氧乙烷作为一种重要医药中间体的地位更加突出。目前，合成手性环氧氯丙烷和苯基环氧乙烷主要有化学法和生物法拆分两大类。生物法拆分法具有反应条件温和、环境友好的优点，但是具有高效拆分外消旋环氧氯丙烷和苯基环氧乙烷的活性微生物报道较少，因此，筛选高选择性的新微生物菌株，并通过基因工程技术获得能够选择性水解外消旋的环氧氯丙烷和苯基环氧乙烷的环氧化物水解酶基因，构建高效表达的基因工程菌有着重要的意义。 

（三）发明内容

本发明目的是提供一种从壤霉菌ZJB120203中提取的环氧化物水解酶基因、含有该基因的重组载体、该重组载体转化得到的重组基因工程菌，以及其在制备重组环氧化物水解酶中的应用，重组环氧化物水解酶制备手性环氧氯丙烷和手性苯基环氧乙烷的应用。 

本发明采用的技术方案是： 

本发明提供一种来源于壤霉菌（Agromyces sp.）ZJB120203的环氧化物水解酶基因，所述环氧化物水解酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，GenBank登录号：JX467176。 

所述环氧化物水解酶基因由如下方法得到：