[发明专利]葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物及其制备方法和应用。 

背景技术

在多糖的结构研究中，单糖组成分析是必不可少的环节。常见的单糖分析方法有柱前衍生化高效液相色谱法，主要的衍生化试剂有1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP），1-(2-萘基)-3-甲基-5-吡唑啉酮（NMP），对氨基苯甲酸（p-AMBA）。衍生化后的产物经HPLC分离、紫外检测器检测。另外，采用较多的是气相色谱法，因为单糖本身没有足够的挥发性，必须在气相色谱分析之前预先转化成易挥发、对热稳定的衍生物，常见的单糖衍生物有三甲基硅醚衍生物、糖肟三甲基硅醚衍生物、糖腈乙酸酯衍生物、糖醇乙酸酯衍生物和三氟乙酸酯衍生物等。在这些衍生化方法中，糖醛酸不能糖腈乙酸酯衍生化和糖醇乙酸酯衍生化（Foster C E, Martin T M, Pauly M. J Vis Exp, 2010, 37 : 1）。 Hama等（Hama Y, Nakagawa H, Kurosawa M, et al. Anal Biochem, 1998, 265 : 42）通过乙硫醇和氯化氢气体对多糖进行硫醇解，再通过硅烷化试剂对单糖进行衍生。Pitthard等（Pitthard V, Finch P. Chromatographia, 2001, 53 : 317）在此基础上改进，通过乙硫醇—三氟乙酸和六甲基二硅氮烷—三甲基硅烷体系对单糖和糖醛酸进行衍生，成功利用GC-MS分析了植物胶中的单糖和糖醛酸；同时也研究了单糖和糖醛酸的乙硫醇-乙酸酯化衍生物，但是认为糖醛酸不能用该方法衍生。 

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种制备葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物方法、萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物，以及气相色谱-质谱联用同时分析中性糖和糖醛酸的方法。 

   一种葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物，其分子结构式 

。

所述的葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物的制备方法，取8 g/mL的葡萄糖醛酸0.5 mL于水解管中，55 ℃水浴加热，氮气吹干；然后加入乙硫醇2 mL和三氟乙酸1 mL，25 ℃水浴磁力搅拌25 分钟，55 ℃水浴加热，氮气吹干；然后加入醋酐2 mL和吡啶2mL，55℃水浴，磁力搅拌5 小时，得到葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物。 

所述葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物的制备方法的应用，用于气相色谱-质谱联用同时分析中性糖和糖醛酸。 

所述气相色谱-质谱联用同时分析中性糖和糖醛酸的方法，取8 g/mL的岩藻糖、葡萄糖、木糖、半乳糖及葡萄糖醛酸各0.5 mL于同一水解管中混合，55 ℃水浴加热，氮气吹干；然后加入2 mL乙硫醇和1 mL三氟乙酸，25 ℃水浴磁力搅拌25 分钟，55 ℃水浴加热，氮气吹干；然后加入醋酐2 mL和吡啶2mL，55℃水浴，磁力搅拌5 小时，不经过浓缩，直接进入气相色谱-质谱联用分析得到岩藻糖、葡萄糖、木糖、半乳糖及葡萄糖醛酸的含量。 

所述的岩藻糖、葡萄糖、半乳糖及葡萄糖醛酸来源于Enterobacter cloacae Z0206细菌分泌的多糖水解产物。 

本发明的有益效果 

本发明得到了葡萄糖醛酸缩硫醇-乙酸酯衍生物；对糖醛酸含量的测定避免了使用对水分十分敏感的硅醚化试剂，因为对糖的硅醚化反应而言，样品的干燥和反应体系无水环境不易控制，少量的水分就可使其失去硅醚化反应能力，因此对反应体系的环境要求很高，易产生实验误差性，而本发明恰恰弥补这一缺陷，能够有效提高样品检测的可操作性和准确性；通过验证分析，岩藻糖、葡萄糖和半乳糖的含量与糖醇乙酸酯化吻合，而糖醛酸含量也与传统的糖醛酸咔唑法测定结果接近，能够同时检测中性糖和酸性糖，不仅高效测定样品中各糖分的含量，而且省时省力，避免样品的耗损，以及仪器重复使用。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明进一步详细的说明； 

图1 Z0206细菌纯化多糖EPS的高效凝胶渗透色谱图；

图2木糖为内标的单糖和葡萄糖醛酸标样的缩硫醇乙酸酯化衍生物总离子流色谱图；

图3缩硫醇乙酸酯化葡萄糖醛酸衍生物质谱图；

图4缩硫醇乙酸酯化葡萄糖醛酸质谱裂解途径；

图5单糖乙酸酯化衍生物气相色谱图。

  具体实施方式