[发明专利]从鱼鳞中提取胶原蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物提取技术领域，主要涉及从鱼鳞中提取胶原蛋白的方法。

背景技术

胶原蛋白是一种重要的功能性蛋白质，它有多种生物学功能，如促进伤口愈合、止血等，抗原性较低，可促进骨骼的形成，增强皮肤代谢等，它还与细胞增生、运动、分化、免疫等功能密切相关。目前，胶原蛋白已被广泛应用于食品、化妆品、医药等行业。目前的胶原蛋白都是从牛皮、猪皮或皮革废弃物中提取的，考虑到如疯牛病、口蹄疫等不安全因素的存在，一些发达国家目前正禁止从猪皮或牛皮中提取胶原蛋白。相比之下，水生动物性胶原蛋白比陆生动物性胶原蛋白具有更高的安全性。

中国是世界上最大的淡水鱼养殖国家，每年废弃的淡水鱼鱼鳞高达5万吨，研究显示，鱼鳞中胶原蛋白含量高达45%。我国关于鱼鳞制备胶原蛋白的专利文献较多，传统工艺中提取胶原蛋白之前需要用大量的酸碱浸泡鱼鳞，以脱去鱼鳞中的灰分，便于后续胶原蛋白的提取。如公开号为CN1775950A的中国专利公开了一种鱼鳞胶原蛋白生产工艺，该工艺采用两次酸碱处理鱼鳞，产生大量的酸液、碱液会对环境造成很大的污染，且引入大量的无机盐增大了后续工作中脱盐的压力，并且产品的分子量不易控制。对鱼鳞进行酸碱预处理后加入蛋白酶水解，酶解耗时较长，导致生产效率低下，生产成本较高。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从鱼鳞中提取胶原蛋白的方法，该方法无需酸碱预处理，不会对环境造成污染，分离提纯效果好且不会影响胶原蛋白的生物活性。

本发明要提供的技术方案是从鱼鳞中提取胶原蛋白的方法，包括以下步骤：

1）将洗净后的鱼鳞进行机械破碎处理；

2）将破碎后的鱼鳞加水置于双螺杆蒸煮热挤压机中，在100～121℃、螺杆转速为50～80转/min条件下热挤压0.5～1小时，得到鱼鳞浓浆；

3）加水稀释鱼鳞浓浆得到鱼鳞浆，往鱼鳞浆中加入鱼鳞重量1%～3%的蛋白酶，在45～60℃下进行酶解2～4小时，酶解完毕后加热至90℃，保温10～30min进行酶灭活；在酶解过程中，利用超声波辅助酶解，其作用时间为20～30min，其功率为200～700w；

4）将灭活后的鱼鳞浆降温至50～55℃，静置沉淀，过滤，得滤液；

5）将滤液上大孔树脂柱，依次用乙醇溶液和氨水洗脱，收集氨水洗脱液；所述的乙醇体积浓度为10～40%，氨水的pH值为7.2～7.6；

6）将氨水洗脱液经超滤膜除杂、纳滤膜浓缩、喷雾干燥后，即为胶原蛋白。

步骤2）中，水的加入量为鱼鳞重量的5%～10%。

步骤3）中，水的加入量为鱼鳞浓浆重量的8～10倍。

步骤3）中，所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶或菠萝蛋白酶。

步骤5）中，滤液上大孔树脂柱的条件为：pH5.5～6.5，上柱流速为3～5BV/h，上柱体积为5～7BV。

步骤5）中，乙醇洗脱条件为：上柱流速为1～3BV/h，用量为2～4BV。

步骤5）中，氨水洗脱条件为：上柱流速为1～3BV/h，用量为2～4BV。

步骤6）中，所述的超滤膜的膜孔径为3000～4000Dal。

步骤6）中，所述的纳滤膜的膜孔径为150～500Dal。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1）本发明采用高压蒸煮将胶原蛋白与鱼鳞分离，无需酸碱预处理，不会对环境造成污染。

2）本发明利用超声波的空化效应、机械效应能促使动物组织破壁或变性，使目标分子充分溶出，具有减少酶解时间、提高酶解效率的优点。

3）采用大孔树脂、超滤、纳滤技术能有效分离纯化胶原蛋白，所得产品纯度高达90%以上，生物活性好且没有腥味。

具体实施方式

以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。

实施例1

1）将洗净后的鱼鳞进行机械破碎处理；

2）将破碎后的鱼鳞和鱼鳞重量5%的水一并置于双螺杆蒸煮热挤压机中，在100℃、螺杆转速为50转/min条件下热挤压0.5小时，得到鱼鳞浓浆；

3）加鱼鳞浓浆重量8倍的水将鱼鳞浓浆稀释成鱼鳞浆，往鱼鳞浆中加入鱼鳞重量1%的木瓜蛋白酶，在45℃下进行酶解2小时，酶解完毕后加热至90℃，保温10min进行酶灭活；在酶解过程中，利用超声波辅助酶解，其作用时间为20min，其功率为200w；

4）将灭活后的鱼鳞浆降温至50℃，静置沉淀，过滤，得滤液；