[发明专利]一种用于检测诺如病毒的分子马达生物传感器试剂盒

说明书

技术领域

本发明是关于食源性病毒快速检测技术的一种。 

背景技术

诺如病毒是引起人类病毒性肠胃炎暴发的重要病原。诺如病毒无论在散发病例中还是暴发疫情中都占有重要地位，从国内外近年对食品诺如病毒的检出情况看，食源性病毒对食品安全的威胁较严重。目前检测诺如病毒的方法主要有电镜技术、PCR技术、ELISA技术、基因芯片等方法。PCR技术是目前诺如病毒检测的主要方法，但是需要病毒富集、RNA提取、引物设计、PCR反应、扩增产物的鉴定等步骤，整个过程所需时间长。并且根据我国目前的经济水平，电镜技术、PCR技术，基因芯片技术用于医疗机构常规检测尚难推广。ELISA方法虽然简单易操作，不需要贵重设备，但其在灵敏度和特异性上有一定的不足。在门诊就诊病例中有不少诺如病毒感染者，国境口岸亦成为诺如病毒感染性疾病输入的主要途径。因此，快速、高效地排查和确认方法可避免疫情大规模扩散，尽快研制快速、特异性高、灵敏度高的食源性诺如病毒检测技术对保障国境口岸的生物安全、医疗门诊确诊具有非常重要的意义。 

发明内容

以受控分子马达技术为核心，集成核酸探针识别、荧光探针标记与检测等技术，建立了一个全新概念的快速检测技术体系。利用ATP酶作为载体对目标物进行检测具有灵敏度高、特异性强、快速的特点。在F₀F₁-ATPase分子马达连接上特异的核酸探针，可以实现对特定食品微生物的快速、特异性、高通量的检测。本发明可将检测时间缩短至1h，且检测灵敏度能达到0.005ng/mL，满足现有的食品微生物检测范围。 

附图说明

附图1为分子马达生物传感器模式图(其中a、b、c、α、β、δ、γ、ε均为ATP合酶亚基)，1为ε亚基抗体，2为链霉亲和素(Strptavidin)，3为N-biotin，4为NV探针，5为诺如病毒RNA。 

附图2为chroNV对不同种食源性病毒的检测结果，纵坐标表示荧光值，横坐标表示检测的样本，其中1为水，2为甲肝病毒，3为轮状病毒。 

附图3为chro NV对13个添加诺如病毒食品样本、2个不含有诺如病毒食品样本的检测结果，纵坐标表示荧光值，横坐标表示检测的样本，1～15为食品检测样本编号。 

具体实施方式

根据诺如病毒ORF1和ORF2之间的一段高度保守区基因设计特异性核酸探针5’-AGGAGATYGCGATCYCCTGTCCAYA，其中探针的5’用生物素进行标记。将该探针通过生物素抗体连接在分子马达上面，记做Chro NV。利用分子马达生物传感器即可对待测样本的RNA进行检测，当样品为诺如病毒RNA时，检测体系的荧光值会发生明显的变化，通过这一变化即可判断样本为阳性。为此，我们设计了一个试剂盒，可以方便、快速对食品中的沙门氏菌进行检测。 

试剂盒组成：