[发明专利]一种用于检测甲肝病毒的分子马达生物传感器试剂盒

说明书

技术领域

本发明是关于食源性病毒快速检测技术的一种。 

背景技术

传统甲肝病毒(HAV)的检测方法是通过细胞培养，但甲肝病毒不仅增殖时间长、增殖能力低，且不形成细胞病变，难以满足检测的要求。20世纪80年代建立的RT-PCR和ICC/PCR(integrated cell culture，PCR)等检测技术提高了检测的灵敏度和特异性，在甲肝病原监测中有很好的应用，但其检测时间仍需5-6h，且容易受PCR扩增产物污染而产生假阳性的可能，这类技术仍然需要依据放射性物质标记的RNA探针或通过凝胶电泳中的特定RNA条带来判断检测结果，且整个过程需要扩增、电泳等步骤，操作繁琐。不仅费时费力，给使用亦带来很大不便。因此急需可靠有效的快速检测方法，缩短窗口期，避免因食源性甲肝病毒感染而引起的甲型肝炎的发生和流行。 

发明内容

本发明核心技术是利用载色体Chromatophore上的F0F1-ATPase分子马达生物传感器，集成核酸探针识别、荧光探针标记与检测等技术，建立了一个全新概念的快速检测技术体系。利用ATP酶作为载体对目标物进行检测具有灵敏度高、特异性强、快速的特点。在F₀F₁-ATPase分子马达连接上特异的核酸探针，可以实现对特定食品微生物的快速、特异性、高通量的检测。本发明可将检测时间缩短至1h，且检测灵敏度能达到0.01ng/mL，满足现有的食源性病毒检测范围。 

附图说明

附图1为分子马达生物传感器模式图(其中a、b、c、α、β、δ、γ、ε均为ATP合酶亚基)，1为ε亚基抗体，2为链霉亲和素(Strptavidin)，3为N-biotin，4为甲肝病毒特异性探针，5为甲肝RNA链。 

附图2为chro HAV对不同种病毒的检测结果，纵坐标表示荧光值，横坐标表示检测的病毒种类。 

附图3为chro HAV对13个添加甲肝病毒食品样品和2个不含有甲肝病毒食品样品的检测结果，纵坐标表示荧光值，横坐标表示检测的样本，1～15为食品检测样本编号。 

具体实施方式

根据甲肝病毒各型设计具有各型共有的特异性的核酸探针5’-AGCGGCGGATATTGGTGAGTTGTTAAGAC-3’，其中探针的5’用生物素进行标记。将该探针通过生物素抗体连接在分子马达上面，利用荧光探针DHPE标记的载色体Chromatophore上的F₀F₁-ATPase分子马达生物传感器即可对待测样本的RNA进行检测。当样品为甲肝病毒RNA时，检测时与生物传感器结合的同时启动ATP合成，体系的荧光值会发生明显的变化，通过这一变化即可判断样本为阳性。为此，我们设计了一个试剂盒，可以方便、快速对甲肝病毒进行检测。 

试剂盒组成：