[发明专利]一种Aβ-淀粉样多肽1-42纯度的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种Aβ-淀粉样多肽1-42纯度的检测方法，特别涉及一种利用反相高效液相色谱法以及不同键合填料的色谱柱来检测Aβ-淀粉样多肽1-42纯度的方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer'sDisease,AD)是一种发病率高、危害极大的中枢神经系统退行性疾病，主要临床症状是智力进行性减退，特征性病理学改变是老年斑，神经元纤维缠结，以海马、皮层区域为主的神经元数目减少。β-淀粉样多肽1-42(Amyloidβ1-42 peptide,简称Aβ42)是存在于阿尔茨海默病患者脑组织中的特异病理改变之物,同时它在AD患者的脑积液及血浆中有所改变。研究表明Aβ-淀粉样多肽1-42在脑内的沉积是阿尔茨海默病的主要原因，因此纯品Aβ-淀粉样多肽1-42对阿尔茨海默病的病理研究有非常重要的作用。

 目前对Aβ-淀粉样多肽1-42的药理研究也已有多种测定方法，如酶联免疫吸附测定法（ELISA），放射免疫分析法（RIA）或免疫放射分析法（Immunoradiometriassay IRMA）,Western印迹法（Western Boltting）免疫沉淀法（Immunoprecipi-tation）和免疫组织化学法（Immunohistochemical,IHC），各种不同检测方法的选择和应用，主要取决于实验研究的要求和目的。以上所有方法的建立是由于制备出了灵敏度高，特异性强和准确性好的Aβ-淀粉样多肽1-42，而对利用HPLC反相高效液相色谱法制备出来的Aβ-淀粉样多肽1-42进行纯度的检测就显得尤为重要。

 对利用HPLC反相高效液相色谱法制备出来的Aβ-淀粉样多肽1-42的检测，目前多数都是利用TFA体系和以聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料（PLRP-S柱）居多，由于PLRP-S柱特殊的不耐压特点，为此所得到的Aβ-淀粉样多肽1-42不但色谱峰形不对称而且所得到的理论纯度与实际纯度差异比较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用反相高效液相色谱法检测Aβ-淀粉样多肽1-42纯度的方法，主要解决现有检测方法中以聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料不耐压导致理论纯度与实际纯度差异比较大，以及对色谱柱以及缓冲盐的选择局限性的技术问题。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种Aβ-淀粉样多肽1-42纯度的检测方法，包括如下步骤：

1）  将Aβ-淀粉样多肽1-42用超纯水超声溶解至完全，用滤膜过滤，取滤液待用。

2）  利用反相高效液相色谱法，对滤液进行检测，其检测条件是：

色谱柱：C4硅胶柱， C8硅胶柱，

流动相：A相：甲酸的水溶液； B相：甲酸的乙腈溶液

 C4柱  时间（min）        A                 B

         0                          90%               10% 

         25.00                    40%               60% 

         30.00                    90%               10% 

C8柱  时间（min）        A                 B

         0                          85%               15%

         25.00                    35%               65%

         30.00                    85%               15%

上述%是质量百分浓度，流速：1ml/min，波长：220nm。

更为优选的方案是Aβ-淀粉样多肽1-42与超纯水添加比例1-2:1(mg:ml)，进一步优选为1:1(mg:ml)，Aβ-淀粉样多肽1-42上样量通常为0.1-0.2mg。

更为优选的方案是：所用C4硅胶柱尺寸为：5um，4.6×250mm（I.D）。

更为优选的方案是：所用C8硅胶柱为尺寸：5um，4.6×250mm（I.D）。

更为优选的方案是：所用的流动相的体系是含体积浓度为0.05-0.1%甲酸水溶液和体积浓度为0.05-0.1%甲酸乙腈溶液。