[发明专利]治疗耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染的生物试剂

说明书

技技术领域

本发明涉及生物领域，具体地说，涉及一种治疗耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染的生物试剂。 

背景技术

鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物具有广泛的耐药性，这使得鲍曼不动杆菌的治疗变得日益困难。碳青霉烯类抗生素被认为是目前临床治疗鲍曼不动杆菌感染最有效的药物之一。近年来感染耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌比例逐年增高，一旦细菌对碳青霉烯类抗生素耐药，则对其他抗生素亦基本耐药，患者往往死于无药可选。研究者将抗感染治疗的目光开始转向噬菌体的研究。噬菌体是一类细菌依赖性病毒，又称细菌病毒，能在菌体内快速增殖并最终裂解细菌从而达到抗菌作用。但是，活噬菌体制剂治疗细菌感染所面临的最主要障碍是宿主专一性太强，宿主谱太窄。自然分离的噬菌体具有高度专一的宿主选择性，往往只能感染单一的细菌分离株，而不能感染同一种细菌的其他分离株。这种高度专一的宿主选择性使噬菌体的应用受到极大限制。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种耐药率低，杀菌谱宽的治疗耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染的生物试剂。 

本发明的技术方案如下：一种治疗耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染的生物试剂，其关键是：所述生物试剂为噬菌体AB3裂解酶的蛋白质溶液，该噬菌体AB3裂解酶的蛋白质序列为： 

MILTKDGFGI IRNELFGGKLDQNQVDAINFI IEKSTESGLTYPEAAYLLATIYHETGLPSGYRTMRPI KEAGSDSYLRSKKYYPY I GYGYVQLTWKDNYER I GKL I G I DLVKNPEKALEPL I A I Q I A I KGMLNGWFTGVGFRRKRPVSKYNKQQYIAARNI INGKDKAELIAKYAI IFERALRSL SEQ NO1； 

所述合成噬菌体AB3裂解酶的基因序列为： 

5’-ATGATTCTGACTAAAGATGGGTTTGGTATTATCCGTAATGAGTTATTCGGAGGTAAGTTAGATCAAAATCAAGTAGATGCAATAAACTTTATTATTGAGAAATCTACTGAGTCTGGTCTAACTTATCCAGAGGCAGCATATTTACTAGCTACCATTTATCATGAGACTGGTTTACCAAGTGGTTATCGAACTATGCGACCAATTAAGGAAGCTGGCTCTGATAGCTACCTTCGATCTAAGAAGTACTACCCTTACATCGGTTATGGTTATGTACAATTAACTTGGAAGGATAACTATGAACGTATCGGTAAACTTATTGGAATTGATCTGGTCAAGAATCCTGAGAAAGCCCTAGAACCATTAATTGCTATTCAAATTGCTATCAAAGGTATGTTGAATGGTTGGTTCACAGGTGTTGGGTTCCGACGTAAACGTCCAGTTAGTAAATACAACAAACAACAGTACATAGCTGCTCGTAATATCATTAATGGGAAGGATAAGGCTGAGCTTATAGCGAAGTACGCTATTATCTTTGAACGTGCTCTACGGAGCTTATAG-3’SEQ NO2。 

来源于噬菌体AB3的裂解酶为治疗耐碳青霉烯类鲍曼不动杆感染提供了另一种途径。噬菌体AB3的裂解酶水解细菌肽聚糖破坏细胞壁以释放子代噬菌体，作为潜在的新型杀菌物质，具有活噬菌体制剂和抗生素无法比拟的优势，细菌对噬菌体裂解酶产生耐药性的几率小于抗生素，噬菌体AB3裂解酶的杀菌谱比噬菌体相对较宽。 

一种噬菌体AB3裂解酶的制备方法，按照如下步骤完成： 

A、噬菌体AB3的分离与纯化： 

取医院污水适量，将处于早期对数生长期的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌悬液和B50ml加入到污水中37℃24h。离心后过滤除菌。10μl处理后的污水与200μl宿主菌混合20min后，与2ml顶层琼脂混匀铺板。单个噬斑经过5次反复纯化后即可得到均一的噬菌体； 

B、提取噬菌体AB3的DNA： 

(1)挑单个细菌菌落接种于200mL液体LB培养基中，37℃振荡培养6h，至早期对数生长期； 

(2)挑噬菌体AB3单个噬斑分别接种到对应宿主菌悬液中，37℃振荡培养16h； 

(3)培养物加DNase I及RNase A至终浓度各1μg/m，37℃×1h； 

(4)按5.84g/100mL加入NaCl，混匀溶解，冰浴1h，离心10000g×10min，收集上清；