[发明专利]南美白对虾传染性肌肉坏死病的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种南美白对虾传染性肌肉坏死病的检测方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)设计实时荧光定量PCR所需要的引物和探针如下所示，方向5’→3’：

正向引物CPI-603：GGGAGTAGATATAAATGTTCAG；

反向引物CPI-732：CAACCACCCAAATTCATA；

探针PCPI-712：FAM-CACCTGCTACCACTTCTTCTCTT-TAMRA；

(2)检测：以南美白对虾肌肉组织为材料提取RNA，逆转录，得到cDNA；以cDNA为模板，在荧光PCR反应体系中加入步骤(1)设计的引物和探针，设定实时荧光PCR仪反应程序，进行实时荧光PCR，从而检测出所检测的南美白对虾是否为传染性肌肉坏死病毒阳性。

2.根据权利要求1所述的南美白对虾传染性肌肉坏死病的检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述的实时荧光定量PCR的反应体系为：每25μL反应体系中含有10倍浓度的含镁离子的TaqDNA聚合酶缓冲液2.5μl、10mM dNTP1μl、TaqDNA聚合酶0.5μL、正向引物CPI-603、反向引物CPI-732以及探针PCPI-712；正向引物CPI-603和反向引物CPI-732的终浓度分别为0.1μmol/L、探针PCPI-712的终浓度为0.06μmol/L。

3.根据权利要求1所述的南美白对虾传染性肌肉坏死病的检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述的实时荧光定量PCR的条件为：48℃5min；95℃5min；95℃15s，60℃15s，40个循环。

4.实现权利要求1～3任一项所述的南美白对虾传染性肌肉坏死病核酸的检测方法的试剂盒，其特征在于包含正向引物、反向引物和荧光标记探针，其中引物和探针如下：

正向引物CPI-603：5′-GGGAGTAGATATAAATGTTCAG-3′；

反向引物CPI-732：5′-CAACCACCCAAATTCATA-3′；

探针PCPI-712：5′-FAM-CACCTGCTACCACTTCTTCTCTT-TAMRA-3′。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包含RT-PCR缓冲液、逆转录反应酶混合物和DEPC处理水。