[发明专利]化学发光底物溶液和含其的试剂盒及应用其的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白的免疫检测，特别是一种用于蛋白免疫检测的化学发光底物溶液，和含有所述溶液的蛋白质定量测定试剂盒以及应用所述溶液或试剂盒的蛋白检测方法。 

背景技术

卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中发病率为第三位，仅次于子宫颈癌和子宫体癌，但死亡率却居首位，因卵巢位于盆腔深部不易扪及，患者出现临床症状就诊时多数已是晚期，其五年生存率徘徊于25-30%之间。而早期卵巢癌患者5年生存率可达90%，因此，提高卵巢癌的早期诊断水平对于早期治疗、延长患者生存期具有重要意义。 

血清肿瘤标志物检测简便且创伤小，因而在肿瘤筛查、诊断、治疗等方面广泛应用。目前CA125是临床上最常用的肿瘤标记物，但由于CA125在生理期和一些盆腔良性病变中也有升高，限制了它的应用。因此，需要一种更加灵敏和特异的肿瘤标记物来提高卵巢癌的早期诊断水平。 

人附睾蛋白4(HE4)基因最初是在人附睾远端上皮细胞中发现的，并认为HE4是WFDC2基因的编码产物，其为弱酸性小分子分泌蛋白，是乳酸蛋白（WAP）结构域家族中的一员。WAP结构域是由近50个氨基酸组成的保守序列和由8个半胱氨酸为特点的4个二硫键核心区组成，其编码产物为具有各种不同功能的小分子分泌性蛋白，分子量为11KDa，远小于CA125，这可能是在卵巢癌早期HE4比CA125更容易分泌进入外周血的主要原因。HE4在正常卵巢组织及良性肿瘤中含量极低，但在卵巢癌中含量较高，因此，血清HE4含量的测定将有助于卵巢癌的早期诊断及治疗效果的监测，联合CA125可提高卵巢癌诊断的敏感度和特异性。 

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。用于检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、酶联免疫吸附法、和化学发光免疫分析。这些方法既可以作为初筛试验也可以作为确认试验，其中化学发光法具有检测线性范围宽、检测仪器简单、操作方便等优点。 

但是，化学发光方法因其所用发光底物溶液稳定性差、光子强度平台期段、信噪比高等缺点，其应用受到很大的局限。本发明提供了一种新的可用于蛋白免疫检测的化学发光底物溶液，其具有稳定性好、灵敏度高、光子强度平台期长等优点。同时，本发明还提供了含有所述溶液的蛋白定量测定试剂盒。 

发明内容

本发明第一方面提供了一种化学发光底物溶液，其包括发光液A和发光液B，其中发光液A含有：0.3-1g/l鲁米诺或异鲁米诺、0.01-0.1g/l 4-碘苯酚、0.01-0.1g/l 1,2-环己二胺四乙酸、4-8g/l硼酸、8-11g/l硼砂、10—12g/l氯化钠，余量为纯化水，其pH值为8.0—10.0；发光液B含有：0.01—0.05g/l过氧化脲、0.5—2ml/l Tween20、4—8g/l硼酸、8—11g/l硼砂、10—12g/l氯化钠，余量为纯化水，其pH值为8.0—10.0。其中所述的发光液A和发光液B等量混合使用。 

本发明第二方面提供了一种HE4化学发光定量测定试剂盒，其含有本发明第一方面所述的化学发光底物溶液。本发明的试剂盒还可以含有酶标记的HE4第一单克隆抗体、HE4第二单克隆抗体包被的固相载体、HE4校准品和洗涤液，其中所述的HE4第一单克隆抗体和第二单克隆抗体分别与HE4蛋白的不同抗原表位结合，所述的酶能够与所述的化学发光底物溶液中的鲁米诺或异鲁米诺反应产生光信号。 

本发明第三方面提供了一种HE4蛋白含量测定的方法，其包括如下步骤：1）将待测样品和HE4校准品分别与酶标记的HE4第一单克隆抗体混合，然后与HE4第二单克隆抗体包被的固相载体接触,使其发生抗原抗体结合反应；2）用洗涤液洗去游离的HE4蛋白和酶标记的HE4第一单克隆抗体；3）将发光液A和发光液B等量混合后加入前述的反应体系中，使发光底物溶液中的底物与所述的酶发生反应；4）用化学发光仪分别检测固相载体上结合的待测样品和校准品对应的发光 值；5）将待测样品的测定值与校准品确定的标准曲线比较，确定待测样品中的HE4含量。 

附图说明

图1是本发明试剂盒标准曲线，以校准品浓度为横坐标，发光值（RLU）为纵坐标绘出的标准曲线。 

具体实施方式