[发明专利]化学发光底物溶液和含其的试剂盒及应用其的检测方法

权利要求书

1.一种化学发光底物溶液，其包括发光液A和发光液B，其特征在于：

所述的发光液A含有0.3-1g/l鲁米诺或异鲁米诺、0.01-0.1g/l 4-碘苯酚、0.01-0.1g/l 1,2-环己二胺四乙酸、4-8g/l硼酸、8-11g/l硼砂、10-12g/l氯化钠，余量为纯化水，其pH值为8.0-10.0；

所述的发光液B含有0.01-0.05g/l过氧化脲、0.5-2ml/l Tween20、4-8g/l硼酸、8-11g/l硼砂、10—12g/l氯化钠，余量为纯化水，其pH值为8.0-10.0。

其中所述的发光液A和发光液B等量混合使用。

2.权利要求1所述的溶液，其特征在于：所述的发光液A含有0.41g/l鲁米诺、0.10g/l 4-碘苯酚、0.12g/l 1,2-环己二胺四乙酸、4.95g/l硼酸、11.44g/l硼砂、11.6g/l氯化钠，余量为纯化水，其pH值为8.7。

3.权利要求1所述的溶液，其特征在于：所述的发光液B含有0.23g/l过氧化脲、1ml/l Tween20、4.95g/l硼酸、11.44g/l硼砂、11.6g/l氯化钠,余量为纯化水，其pH值为8.7。

4.一种人附睾蛋白4（HE4）化学发光定量测定试剂盒，其含有权利要求1到3中任一项所述的化学发光底物溶液。

5.权利要求4所述的试剂盒，其还含有酶标记的HE4第一单克隆抗体、HE4第二单克隆抗体包被的固相载体、HE4校准品和洗涤液，其中所述的酶能够与所述的化学发光底物溶液中的鲁米诺或异鲁米诺反应产生光信号，所述的HE4第一单克隆抗体和第二单克隆抗体分别与HE4蛋白的不同抗原表位结合，所述的洗涤液优选为20×PBS浓缩洗涤液。

6.权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的酶是碱性磷酸酶和/或辣根过氧化物酶。

7.权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的固相载体是微孔板、塑料珠、塑料管和/或磁性颗粒，其优选为48或96孔的微孔板。

8.权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的HE4校准品是以组分Ⅴ的牛血清白蛋白缓冲液为溶剂，加入HE4蛋白纯品（纯度不低于90%）配制成具有多于一个浓度的浓度梯度的HE4校准品。

9.一种HE4蛋白含量的测定方法，其包括如下步骤：

1）将待测样品和HE4校准品分别与酶标记的HE4第一单克隆抗体混合，然后与HE4第二单克隆抗体包被的固相载体接触,使其发生抗原抗体结合反应；2）用洗涤液洗去游离的HE4蛋白和酶标记的HE4第一单克隆抗体；3）将发光液A和发光液B等量混合后加入前述的反应体系中，使发光底物溶液中的底物与所述的酶发生反应；4）用化学发光仪分别检测固相载体上结合的待测样品和校准品对应的发光值；5）将待测样品的测定值与校准品确定的标准曲线比较，确定待测样品中的HE4含量。

10.权利要求9所述的方法，其中所述的酶为碱性磷酸酶和/或辣根过氧化物酶、所述的底物为鲁米诺或异鲁米诺。