[发明专利]上皮细胞粘附分子的核酸适体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸，特别涉及EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule)上皮细胞粘附分子的核酸适体制备方法及其在肿瘤早期检测、治疗和预后中的应用。

背景技术

EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule)上皮细胞粘附分子属于黏附分子家族，也称为17-A，ESA，EGP40，Trop-1，KSA,CD326，TACSTD1，CO17-1A，GA733-2等。EpCAM是一种由肿瘤相关钙信号转导1(tumor-associated calcium signal transducer 1,TACSTD1)基因编码的一个分子量30-40kDa的单次跨膜蛋白，参与调节细胞粘附、介导信号转导、细胞迁移、增殖和分化等功能（1、Kurtz JE，Dufour P.Adecatumumab:an anti-EpCAM monoclonal antibody，from the bench to the bedside［J］.Expert Opin BiolTher，2010，10(6):951-958；2、Trzpis M，McLaughlin PM,de Leij LM，et al．Epithelial cell adhesion molecule.More than a carcinoma marker and adhesion molecule［J］．Am J Pathol,2007，171(2):386-395）。

EpCAM表达在人部分正常上皮细胞和大多数恶性上皮细胞表面，目前普遍认为它对肿瘤的生物学特性起重要作用。病理情况下，EpCAM几乎表达于所有的腺癌中，包括结直肠腺癌、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、前列腺癌、胰腺癌以及肝细胞癌和视网膜母细胞瘤（1、Kurtz JE，Dufour P.Adecatumumab:an anti-EpCAM monoclonal antibody，from the bench to the bedside［J］.Expert Opin BiolTher，2010，10(6):951-958）。研究发现EpCAM也是一些肿瘤干细胞的标记物，Kimura等的研究发现EpCAM阳性的肝癌干细胞能够诱导免疫缺陷的小鼠发生肿瘤（3、Kimura O，Takahashi T，Ishii N，et al．Characterization of theepithelial cell adhesion molecule(EpCAM)+cell population in hepatocellular carcinoma cell lines［J］．Cancer Sci，2010，101(10):2145-2155．）。将肝细胞癌EpCAM阳性及阴性亚群细胞分别注射到免疫缺陷的小鼠体内，结果显示形成肿瘤所需的癌细胞数EpCAM阳性者远少于EpCAM阴性者，且注射EpCAM阳性癌细胞的小鼠所产生的肿瘤比注射EpCAM阴性者更大，说明EpCAM阳性的癌细胞致瘤性比EpCAM阴性的癌细胞大。肝细胞癌细胞系中EpCAM阳性的亚群克隆速率远远大于EpCAM阴性的亚群。研究还发现，EpCAM阳性的癌细胞可以分化为EpCAM阳性和阴性的细胞，而EpCAM阴性的癌细胞只能分化为EpCAM阴性的细胞，说明EpCAM阳性的癌细胞具有多项分化的潜能。

肿瘤的复发、转移是其死亡率居高不下的主要原因，循环血肿瘤细胞则是肿瘤复发、转移的根源。及时发现循环血中肿瘤细胞，可以预防肿瘤复发和转移，提高患者生存率，改善预后。EpCAM抗体与芯片技术结合用于分离肿瘤患者外周血中的肿瘤细胞，结果在99．1％(115／116)的血样品中成功分离出数量不等的肿瘤细胞(其中包括所有7例早期前列腺癌患者)；而且循环血肿瘤细胞数的改变与影像学检查的疾病进程高度关联（4、Nagratb S，Sequist LV，Mabeswaran S，et al．Isolation of rare circulating tumour cells in cancer patients by microchip technology．Nature，2007，450(7173)：1235—1239）。但是，抗体由于分子量较大、位阻大、难储存易降解等缺点，很大程度抑制了循环肿瘤细胞的检测。