[发明专利]低密度脂蛋白胆固醇定量法

说明书

本申请是申请号为200910117837.3，申请日为2009年3月6日，发明名称为“高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇定量法”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及对低密度脂蛋白胆固醇的改良的测定方法及相关试剂盒。

背景技术

血浆中胆固醇的存在和运输形式为血浆脂蛋白，即血浆中非极性的脂类包括胆固醇和亲水性的载脂蛋白结合，使得脂蛋白有较强的水溶性可以在血中运输。血浆脂蛋白可以分为高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和乳糜颗粒四种，其中低密度脂蛋白主要负责将胆固醇运输至外周组织，而高密度脂蛋白是清除动脉壁上的胆固醇向肝脏运输。流行病学和临床研究表明，低密度脂蛋白胆固醇水平与动脉硬化类疾病冠心病的发生率成正相关，高密度脂蛋白胆固醇与动脉硬化类疾病冠心病的发生率成负相关，即具有抗动脉硬化活性。因此高密度脂蛋白胆固醇HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇LDL-C是当前临床实验室血脂测定中最有价值的心脑血管疾病的危险因素指标。

测定高低密度脂蛋白胆固醇的方法很多，包括超离心法、色谱法、电泳法和沉淀法等。超离心法可作为基本的定量法使用，它使用超速离心机进行分离，根据比重的差别分离LDL或HDL，进而测定其中的胆固醇含量；而后来发展的电泳法以醋酸纤维膜或琼脂糖凝胶等做载体分离，然后根据酶法测定胆固醇含量；在沉淀法中，沉淀剂凝结除高密度脂蛋白以外的脂蛋白，凝结的脂蛋白通过离心分离沉淀，根据酶反应测定上清即高密度脂蛋白胆固醇的含量；测定低密度脂蛋白胆固醇的第一代化学沉淀法，采用PVS和PEGME沉淀LDL，用离心分离法收集沉淀物，然后根据酶反应测定其中的胆固醇含量；以上方法均需要特殊仪器，包括超速离心机、电泳仪和离心机等，操作复杂，难于自动化，从而无法在临床实验室开展。

发明内容

本方法所涉及的直接定量低密度脂蛋白胆固醇的方法，采用优化的PVS沉淀法，仅包裹LDL使其无法参与酶反应，但不会沉淀LDL即形成不溶物，然后LDL中的胆固醇成分在第一和第二表面活性剂的联合作用下直接测量；详细而言，即高密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和乳糜微粒中的胆固醇在对低密度脂蛋白以外的脂蛋白胆固醇反应性较好的第一表面活性剂的作用下参与胆固醇脂酶反应，低密度脂蛋白胆固醇在第二表面活性剂的作用下溶解释放以进行酶反应法测定其胆固醇含量。酶反应中第一步产生的过氧化氢不必使用过氧化物酶去除，所以在第二步中不必加入抑制过氧化物酶活性的叠氮钠。本发明中可以使用生物防腐剂。本发明的方法中无需标本前处理即沉淀和离心，可以直接在自动生化仪测定标本中的低密度脂蛋白胆固醇。

本发明所用的优化的聚乙烯硫酸三钾PVS化学沉淀法即优化浓度和比例的PVS和PEGME，在检测低密度脂蛋白胆固醇时，采用优化浓度和比例的PVS和PEGME包裹LDL，优化后的比例为1：400-500，浓度分别为1-20mg／L和4g-10g／L；同时为了避免VLDL的共同被包裹，采用能掩蔽二价阳离子的金属螯合剂包括EDTA或EGTA等，其使用浓度为0.1mM-2mM；其他只要是和低密度脂蛋白亲和性较强的化合物，可以是促使其凝聚的聚阴离子、肝素钠、磷钨酸、环糊精硫酸盐等，或对其有较强亲和力又不导致沉淀产生的皂苷类化合物也可以使用，它们可以单独使用或两种或以上组合使用，这些物质的使用量不受特别限制，根据物质种类及组合方式而不同，尽量选用凝结或混浊少的组合；同时为了生化仪的维护要求，尽量不使用或使用低浓度的镁离子。