[发明专利]嗜肺军团菌快速鉴定方法无效
| 申请号： | 201210346366.5 | 申请日： | 2012-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN103525902A | 公开（公告）日： | 2014-01-22 |
| 发明（设计）人： | 朱庆义;胡朝晖;赵利伟;戈立秀 | 申请（专利权）人： | 南宁金域医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 530000 广西壮族自治区南宁*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 军团 快速 鉴定 方法 | ||
1.一种嗜肺军团菌快速鉴定方法，其特征在于，基于荧光共振能量转移原理，选取一种猝灭荧光基团，建立新型的实时荧光PCR熔解曲线法对嗜肺军团菌进行鉴定。
2.权利要求书1所述的嗜肺军团菌快速鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法的步骤如下所列，
（1）实时荧光PCR反应建立中所采用的一对引物和一对探针：
上游引物：5’-AGGGTTGATAGGTTAAGAGC-3’，
下游引物：5’-CCAACAGCTAGTTGACATCG-3’，
锚定探针：5’-CCCATACTCGAGTCAACC(FAM)-3’，
猝灭探针：5’-(BHQ1)TATTATCTGACCGTCCCAG(ph)-3’；
（2）提取DNA：取痰液标本1ml加等量0.1%二硫苏糖醇痰消化液处理，37℃下放置30min，离心沉淀，于沉淀物种中加入自配的基因组DNA提取液60μl，充分混匀，55℃水浴30min，100℃水浴10min，上清液即是基因组DNA模板；
（3）以上取得的基因组DNA为模板，进行实时荧光PCR反应程序：先95℃预变性3 min，再95℃变性10s，57℃退火20s，72℃延伸30s，进行50个循环；
（4）检测结果判定，熔解曲线分析程序为：95℃ 1min；40℃ 2min；以1℃/5s的速度，从40℃升温至85℃，嗜肺军团菌的Tm值均为57℃，其它非嗜肺军团菌及非军团菌均无57℃的Tm值。
3.如权利要求2所述的嗜肺军团菌快速鉴定方法，其特征在于所述PCR反应体系如下：
。
4.如权利要求2所述的嗜肺军团菌快速鉴定方法，其特征在于所述基因组DNA提取液为：
。
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