[发明专利]一种组氨瑞林的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及组氨瑞林的合成方法 ，特别涉及到固液相合成组氨瑞林的方法

背景技术

组氨瑞林 又称LHRH-Hydrogel implant，RL 0903，结构式为                                                

分子式是：C66H86N18O12    分子量是 :1323.5

  组氨瑞林是一种人工合成的九肽，用于治疗中枢性性早熟症。

组氨瑞林是一种促黄体激素释放激素（LHRH）激动剂，美国学者萧尔（Shore）等报告，对于晚期前列腺癌患者，每年一次给予组氨瑞林长效埋植剂皮下埋植，能长期稳定地抑制睾酮，使其保持去势水平。

现有的合成方法均存在着一定得缺点，每一次脱保护均需用三氟乙酸，故三废污染多，接肽收率低，生产成本高 ，限制了组氨瑞林的大规模生产和应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种组氨瑞林的合成方法，主要解决现有的组胺瑞林合成方法接肽收率低，三废污染多的技术问题。

本发明的技术方案：一种组氨瑞林的合成方法，包括如下步骤： a、以CTC树脂为起始原料 ，在碱性条件下与Fmoc-Pro-OH的羧基相连，得到Fmoc-Pro-CTC树脂；

b、其余8个氨基酸按照组氨瑞林依次合成；

c、全保护切肽：用全保护切割试剂裂解得：Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro 9肽片段；

d.用乙胺与全保护9肽片段在HOBT的作用下获得全保护组氨瑞林片段；

e.裂解全保护组氨瑞林片段获得组氨瑞林粗品。

具体内容如下：

1.合成Fmoc-Pro-CTC树脂

  取CTC树脂用DCM浸泡，使树脂充分溶胀，吹干，然后加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH(FW:337.4)反应1.5小时，吹干,分别用DMF和甲醇洗涤吹干，获得Fmoc-Pro-CTC 树脂。

所用的接肽试剂DIEA:DMF(体积比)=1:15；混合物中：CTC树脂的体积浓度为5-20ml/g，Fmoc-Pro-OH摩尔数为CTC树脂的1.5-2倍。

2.制备Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂：

  在Fmoc-Pro-CTC 树脂中加入脱保护试剂，室温（20-30℃，后同）下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Arg(pbf)-OH(FW:648.8),TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。

所用的脱保护试剂 PIP:DMF(体积比）=1:4；所用的接肽试剂DIEA:DMF（体积比）=1:15；混合物中：Fmoc-Pro-CTC树脂的体积浓度为 5-20ml/g，Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为Fmoc-Pro-CTC 树脂的2-3倍，TBTU的摩尔数为Fmoc-Pro-CTC 树脂的2-3倍，HOBT的摩尔数为Fmoc-Pro-CTC 树脂的2-3倍，Fmoc-Pro-CTC树脂的重量与脱保护试剂的的加入量的比例为：每克树脂加入5-20ml脱保护试剂。

3.制备Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂

  在 Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂中加入脱保护试剂，室温下反应5-15分钟，优选是15分钟，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Leu-OH(FW:321),TBTU(FW:321)和HOBT(135)的混合物，室温下反应1-1.5小时，优选是1.5小时，吹干，分别用DMF和甲醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC树脂。