[发明专利]小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法

权利要求书

1.小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤： 

（1）将小球藻粉和纯水混合后搅拌得混合溶液，在所述混合溶液中提取小球藻蛋白质，得到的粗提液作为下一次的待提取溶液进行再提取，将获得的溶液离心，去除沉淀获得蛋白上清液, 再真空冷冻干燥，获得小球藻蛋白质粉；                           （2）以步骤（1）得到的小球藻蛋白质粉为基础, 配置浓度为1~4%（w/v）的小球藻蛋白水溶液，加水解酶进行水解，水解后，灭酶，冷却至室温后将水解液离心，取上清液，然后,经截留分子量为10 KD的超滤离心管过滤，滤液再经过3 KD、5 KD的超滤离心管过滤，即可获得分子量大小范围为＜3 KD、3-5 KD、5-10 KD、>10 KD的小球藻多肽水解液；

 (3) 以步骤（2）得到的3-5 KD小球藻多肽水解液为基础，使用离子交换色谱DEAE-52分离纯化，按照出峰顺序共收集到四个峰A1~A4， 将收集到的吸收峰A2再进行凝胶色谱葡聚糖凝胶G-25分离纯化，按照出峰顺序共收集到二个峰A2-1和A2-2；

(4) 以步骤（3）得到的纯化的小球藻多肽水解液A2-1为基础,再采用三聚磷酸钠（TPP）离子交联法即可得到小球藻多肽-壳聚糖纳米粒。

2.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（1）所述小球藻粉和纯水的质量比为1:10～1:40,所述搅拌时间为30～120分钟。

3.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（1）所述提取小球藻蛋白质为在温度4℃～10℃、压力50MPa～250MPa的条件下提取。

4.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（1）所述再提取所提取的次数为1次～8次，每次提取的时间为10min～60min；所述离心为在温度4~8 ℃,转速为5000~10000 r/min下离心10~60 min。

5.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（2）所述水解酶为木瓜蛋白酶，水解条件是温度30~80 ℃，pH= 5~10，酶与小球藻蛋白质水溶液的比为1%~5%（w/v），水解时间为3~10h。

6.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（2）所述灭酶为在100 ℃水中灭酶10 min；所述离心为在 8000 r/min 下离心 25 min。

7.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（2）所述过滤为在8000 g、4 ℃条件下经超滤离心管过滤。

8.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（3）所述使用离子交换色谱DEAE-52分离纯化的具体分离条件是：上样体积为3~15 mL，洗脱速度为0.2~2 mL/min，洗脱液为蒸馏水，检测波长为280 nm；所述凝胶色谱葡聚糖凝胶G-25分离纯化的具体分离条件是：上样体积为3~15 mL，洗脱速度为0.2~2 mL/min，洗脱液为蒸馏水，检测波长为280 nm。

9.根据权利要求1所述的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（4）所述三聚磷酸钠（TPP）离子交联法为把1~5mL浓度为0.2~2 mg/mL的小球藻多肽水解液A2-1与3~10 mL浓度为1~3 mg/mL的壳聚糖醋酸溶液混合均匀，再将浓度为0.1~2 mg/mL的TPP水溶液逐渐滴加到A2-1和壳聚糖醋酸溶液体系中，搅拌反应30 min，在 4 ℃、10000 r/min下高速离心30 min，收集沉淀物，将其于45℃烘箱中干燥。