[发明专利]嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶、其发酵制备方法及发酵培养基

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶、其发酵制备方法及发酵培养基。 

背景技术

家蚕作为一种重要的经济动物与鳞翅目昆虫研究模型，具有生长快、繁殖周期短的特点。在幼虫期20多天时，家蚕除了自身肠道分泌的消化酶具有消化食物的能力之外，肠道中种类繁多、数量巨大的微生物群体也对其食物的消化和营养的吸收起重要作用。同时，由于长期家庭饲养的结果，家蚕防病能力极其脆弱；肠道内有益菌群的存在，能够有效地帮助家蚕抵制内源性细菌病害的侵袭。因此，肠道里的微生物对家蚕具有重要意义。 

国内研究者曾采用传统的培养手段初步调查了家蚕肠道微生物种类。已经发现的家蚕肠道主要菌群有肠球菌、葡萄球菌、阴沟肠杆菌和腊样芽孢杆菌。张剑飞等的研究发现了丰富的细菌种类和动态变化，其中微球菌和芽孢杆菌占优势。从这些研究中可以看出，虽然人们对家蚕肠道细菌有一定的认识，但可能是由于蚕种质资源及其肠道细菌的多样性或者研究手段的差异，目前尚没有较为一致的意见。 

目前关于嗜麦寡养食单孢菌(Stenotrophomnas maltophilia)的报道多集中于其临床分布特点及其耐药性的研究，并且大多数学者认为该菌为非发酵菌。嗜麦寡养食单孢菌为革兰氏阴性菌，广泛存在于自然界中，也可寄居于人或动物的呼吸道和肠道。2003年杨丽等首次从环节动物双齿围沙蚕的消化道中发现了该菌，但对该菌发酵产蛋白酶的条件以及所产酶的酶学性质的研究还未见报道。 

发明内容

本发明在不同发酵条件下对嗜麦寡养食单孢菌进行培养，将得到的含蛋白酶粗提取液用硫酸铵进行盐析，得到的固体溶于稀盐中，控制不同酶促反应条件，研究酶学性质，在微生态制剂的研究方面有一定的实际意义。 

本发明的目的在于公开了嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶。 

本发明的第二个目的在于公开了嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的发酵制备方法。 

本发明的第三个目的在于公开了嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的发酵培养基。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 

嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶，所述嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶通过下述方法制备所得：

(1)、以嗜麦寡养食单孢菌为菌种，在液体发酵培养基中进行发酵，35℃下培养36h；其中发酵培养基中各物质的质量体积分数为玉米粉1.0％(即100ml水溶液中含有玉米粉的量为1.0g)、黄豆粉1.0％、MgSO₄ 0.04％、NaCl 1.5％和K₂HPO₄ 0.1％，发酵培养基的pH值为7.0，发酵培养基的装液量60％； 

(2)、将步骤(1)中培养36h的的发酵液4℃下4000r/min高速冷冻离心10min，取上清液，在上清液中缓慢地加入固体硫酸铵至80％饱和度，4℃下沉淀12h，待蛋白酶析出，冷冻离心，取沉淀加入去离子水稀释即为含蛋白酶的酶液。 

上述技术方案中所述的嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶，其中，所述嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的酶促反应温度为45℃-55℃；酶促反应pH值为9.0。 

上述技术方案中所述的嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶，其中，所述嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的酶促反应温度为50℃。 

上述技术方案中任一技术方案所述的嗜麦寡养食单胞菌蛋白酶，其中，嗜麦寡养食单孢菌在液体发酵培养基中进行发酵步骤之前还包括将嗜麦寡养食单孢菌接种于富集培养基中摇床培养6h的富集培养步骤，所述富集培养基的制备方法为：称取胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl 1g，溶解并定容于100mL容量瓶中，高压灭菌。 

嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的发酵制备方法，所述制备方法包括下述步骤： 

(1)、以嗜麦寡养食单孢菌为菌种，在液体发酵培养基中进行发酵，35℃下培养36h；其中发酵培养基中各物质的质量体积分数为玉米粉1.0％，黄豆粉1.0％，MgSO4 0.04％，NaCl 1.5％，K₂HPO₄ 0.1％，发酵培养基的pH值为7.0，发酵培养基的装液量60％； 

(2)、将步骤(1)中培养36h的的发酵液4℃下4000r/min高速冷冻离心10min，取上清液，在上清液中缓慢地加入固体硫酸铵至80％饱和度，4℃下沉淀12h，待蛋白酶析出，冷冻离心，取沉淀加入去离子水稀释即为含蛋白酶的酶液。 

嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的发酵制备方法，所述发酵制备方法包括下述步骤：