[发明专利]嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶、其发酵制备方法及发酵培养基有效
| 申请号： | 201210310200.8 | 申请日： | 2012-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN102864133A | 公开（公告）日： | 2013-01-09 |
| 发明（设计）人： | 王在贵;李阿敏;刘朝良;刘金阳;李大辉;刘华霞;曹双凤 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/52 | 分类号： | C12N9/52;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 230036 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 嗜麦寡养食单孢菌 蛋白酶 发酵 制备 方法 培养基 | ||
1.嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶，所述嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶通过下述方法制备所得：
(1)、以嗜麦寡养食单孢菌为菌种，在液体发酵培养基中进行发酵，35℃下培养36h；其中发酵培养基中各物质的质量体积分数为玉米粉1.0％、黄豆粉1.0％、MgSO4 0.04％、NaCl 1.5％和K2HPO4 0.1％，发酵培养基的pH值为7.0，发酵培养基的装液量60％；
(2)、将步骤(1)中培养36h的发酵液4℃下4000r/min高速冷冻离心10min，取上清液，在上清液中缓慢地加入固体硫酸铵至80％饱和度，4℃下沉淀12h，待蛋白酶析出，冷冻离心，取沉淀加入去离子水稀释即为含蛋白酶的酶液。
2.根据权利要求1所述的嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶，其特征在于：所述嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的酶促反应温度为45℃-55℃；酶促反应pH值为9.0。
3.根据权利要求2所述的嗜麦寡养食单胞菌蛋白酶，其特征在于：所述嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的最适酶促反应温度为50℃。
4.根据权利要求1-3中任一权利要求所述的嗜麦寡养食单胞菌蛋白酶，其特征在于，嗜麦寡养食单孢菌在液体发酵培养基中进行发酵步骤之前还包括将嗜麦寡养食单孢菌接种于富集培养基中摇床培养6h的富集培养步骤，所述富集培养基的制备方法为：称取胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl 1g，溶解并定容于100mL容量瓶中，高压灭菌。
5.嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的发酵制备方法，所述发酵制备方法包括下述步骤：
(1)、以嗜麦寡养食单孢菌为菌种，在液体发酵培养基中进行发酵，35℃下培养36h；其中发酵培养基中各物质的质量体积分数为玉米粉1.0％，黄豆粉1.0％，MgSO4 0.04％，NaCl 1.5％，K2HPO4 0.1％，发酵培养基的pH值为7.0，发酵培养基的装液量60％；
(2)、将步骤(1)中培养36h的的发酵液4℃下4000r/min高速冷冻离心10min，取上清液，在上清液中缓慢地加入固体硫酸铵至80％饱和度，4℃下沉淀12h，待蛋白酶析出，冷冻离心，取沉淀加入去离子水稀释即为含蛋白酶的酶液。
6.嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的发酵制备方法，所述发酵制备方法包括下述步骤：
(1)、将嗜麦寡养食单孢菌接种于富集培养机中摇床培养6h的富集培养步骤，所述集培养基的制备方法为：称取胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl 1g，溶解并定容于100mL容量瓶中，高压灭菌；
(2)、以富集培养的嗜麦寡养食单孢菌为菌种，在液体发酵培养基中进行发酵，35℃下培养36h；其中发酵培养基中各物质的质量体积分数为玉米粉1.0％，黄豆粉1.0％，MgSO40.04％，NaCl 1.5％，K2HPO4 0.1％，发酵培养基的pH值为7.0，发酵培养基的装液量60％；
(3)、将步骤(2)中培养36h的的发酵液4℃下4000r/min高速冷冻离心10min，取上清液，在上清液中缓慢地加入固体硫酸铵至80％饱和度，4℃下沉淀12h，待蛋白酶析出，冷冻离心，取沉淀加入去离子水稀释即为含蛋白酶的酶液。
7.嗜麦寡养食单孢菌蛋白酶的发酵培养基，其特征在于：所述发酵培养基中各物质的质量体积分数为玉米粉1.0％，黄豆粉1.0％，MgSO4 0.04％，NaCl 1.5％，K2HPO4 0.1％，发酵培养基的pH值为7.0。
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