[发明专利]一种人类粒细胞抗原（HNA）1-5系统基因分型的PCR-SBT方法及试剂有效
| 申请号： | 201210297522.3 | 申请日： | 2012-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN102827932A | 公开（公告）日： | 2012-12-19 |
| 发明（设计）人： | 朱发明;何俊俊;何吉;吕杭军 | 申请（专利权）人： | 浙江省血液中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 刘晓春 |
| 地址： | 310006 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人类 粒细胞 抗原 hna 系统 基因 pcr sbt 方法 试剂 | ||
1.一种人类粒细胞抗原（HNA）1-5系统基因分型的PCR-SBT方法，其特征在于它对五个HNA抗原系统的基因进行分型，所述五个HNA抗原系统分别为HNA-1、HNA-2、HNA-3、HNA-4和HNA-5，所述方法包括以下步骤：
（1）制备人基因组DNA；
（2）提供扩增引物，用聚合酶链反应分别扩增人基因组DNA中HNA-1、HNA-2、HNA-3、HNA-4和HNA-5抗原系统的基因序列；
（3）将步骤（2）得到的扩增产物进行双酶切纯化；
（4）提供测序引物，将步骤（3）得到的纯化产物进行测序PCR反应；
（5）将步骤（4）得到的测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；
（6）将步骤（5）获得的序列通过软件分析，确定其基因型。
2.如权利要求1所述的一种人类粒细胞抗原（HNA）1-5系统基因分型的PCR-SBT方法，其特征在于所述步骤（2）中的扩增引物为5对寡核苷酸分别扩增HNA-1、HNA-2、HNA-3、HNA-4和HNA-5抗原系统的基因序列：
（1）HNA-1抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-1F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT GGGCCAAGATGCTCTAAGAC-3’
HNA-1R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC TGGCTCTTACCAAGTATTTCAGG-3’
（2）HNA-2抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-2F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT CTGSTGAAAAAGCAGAAAGAGAT-3’
HNA-2R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC TAGGCTGAGAGGCTGGAAAG-3’
（3）HNA-3抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-3F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT CTTTTCCCCCTGTGAATGTG-3’
HNA-3R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC CATGCCCATCCTCATAGGTC-3’
（4）HNA-4抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-4F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT GTTCCCACTTCTCCCCACA-3’
HNA-4R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC GGACAGATATGGGCATGGTC-3’
（5）HNA-5抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-5F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT TCTGATATTCCCCACCCTGA-3’
HNA-5R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC ACCCTAAGACCCCTGTCCAC-3’
所述步骤（4）中的测序引物为用于测序分析的2条寡核苷酸测序引物：
M13F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT-3’
M13R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC-3’。
3.如权利要求1所述的一种人类粒细胞抗原（HNA）1-5系统基因分型的PCR-SBT方法，其特征在于所述步骤（3）中纯化所需的两种酶为虾碱性磷酸酶和核酸外切酶Ⅰ。
4.一种人类粒细胞抗原（HNA）1-5系统基因分型的PCR-SBT方法所用的试剂，其特征在于它由用于扩增的引物和用于测序分析的寡核苷酸测序引物组成；
所述用于扩增的引物为：
（1）HNA-1抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-1F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT GGGCCAAGATGCTCTAAGAC-3’
HNA-1R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC TGGCTCTTACCAAGTATTTCAGG-3’
（2）HNA-2抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-2F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT CTGSTGAAAAAGCAGAAAGAGAT3’
HNA-2R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC TAGGCTGAGAGGCTGGAAAG-3’
（3）HNA-3抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-3F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT CTTTTCCCCCTGTGAATGTG-3’
HNA-3R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC CATGCCCATCCTCATAGGTC-3’
（4）HNA-4抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-4F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT GTTCCCACTTCTCCCCACA-3’
HNA-4R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC GGACAGATATGGGCATGGTC-3’
（5）HNA-5抗原系统的基因序列的扩增引物，
HNA-5F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT TCTGATATTCCCCACCCTGA-3’
HNA-5R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC ACCCTAAGACCCCTGTCCAC-3’
所述2条寡核苷酸测序引物序列如下：
M13F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT-3’
M13R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC-3’。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江省血液中心，未经浙江省血液中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210297522.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
