[发明专利]一种鉴定水稻低植酸突变体zju-lpa3杂交后代基因型的引物及方法有效
| 申请号： | 201210297318.1 | 申请日： | 2012-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN102808028A | 公开（公告）日： | 2012-12-05 |
| 发明（设计）人： | 舒庆尧;赵海军;谭瑗瑗;刘庆龙 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 水稻 低植酸 突变体 zju lpa3 杂交 后代 基因型 引物 方法 | ||
1.一种引物，其特征在于，正向引物为ZW3F和ZW4F，反向引物为ZW3R；
ZW3F：5’-AATTAACGGCTTGTAAAACGTG-3’
ZW4F：5’-GGTTCCCACTCGGTATGCG-3’；
ZW3R：5’-ACGATGGTTGTTTGGGTCTTG-3’。
2.一种鉴定水稻低植酸突变体zju-lpa3杂交后代基因型的方法，包括如下步骤：
(1)提取水稻样品苗期叶片的总DNA；
(2)以所述总DNA为模板，利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增，扩增产物经凝胶电泳分离、染色后拍照成像；
(3)根据成像结果，判断水稻样品的基因型；
若只出现390bp特征带，则该水稻样品为不含水稻低植酸基因ZJU-LPA3的纯合型材料；若只出现746bp特征带，则该水稻样品为含水稻低植酸基因ZJU-LPA3的纯合型材料；若同时出现390和746bp特征带，则该水稻样品为含水稻低植酸基因ZJU-LPA3的杂合型材料；
所述水稻低植酸基因ZJU-LPA3的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用CTAB法提取总DNA。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为20μL，其中，2×PCR Master Mix缓冲液10μL、10μM正反向引物各0.4μL、总DNA 1μL、灭菌去离子水补至20μL。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性30s，57℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸7min。
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