[发明专利]拟除虫菊酯类α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯的半抗原合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯半抗原合成方法，属于有机化学及免疫化学技术领域。

背景技术

免疫分析是基于抗原、抗体的特异性反应的一种分析方法，在医学上已广泛应用于微量物质的检测。免疫分析具有特异性强、灵敏度高，甚至更低、方便快捷、分析容量大、分析成本低、安全可靠等优点，近年来得到迅速发展。

建立免疫分析方法，首先必须制备出对农药特异性强亲和力高的抗体。一般农药的分子量小于1000，不具备刺激机体产生针对农药抗原决定簇的特异性抗体，为小分子半抗原，因此必须与大分子载体偶联后才具有免疫原性。要实现与大分子物质的偶联，半抗原分子上必须具备能共价结合到载体上的一个活性基团(如氨基、羧基、羟基和巯基等)，对多数不具备活性基团的农药则通常进行衍生化制备或由原料合成，也可以用其他代谢及降解产物作为半抗原。一般理想的半抗原应尽量具备与待测物类似的立体化学特征，以减少免疫交叉污染，而且应尽量保证半抗原与载体的大分子复合物的特征结构能最大限度地被免疫活性细胞所识别。

典型的半抗原结构中应具备适当末端活性基团，如-NH2、-COOH、-OH、-SH等；同时活性基团与载体之间应具备一定长度的间隔臂，一般为4-6个碳链长度(0.5-0.8nm)。间隔臂一般为非极性，且除供偶联的活性基团外，不应有其它高免疫活性的结构，如苯环、杂环等，以降低抗体对间隔臂的识别和间隔臂对待测物结构特征的影响；间隔臂还应远离待测物的特征结构部分和官能团，有利于高选择性和高亲合性抗体的产生。

半抗原合成以后，通过化学方法使半抗原分子与载体蛋白连接制备免疫原。用作载体的蛋白通常有牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HAS)和钥孔血蓝蛋白(KLH)等。农药人工抗原合成成功后通常需要经过透析或过柱的方法对其进行纯化。对纯化后人工抗原进行鉴定，一方面是定性判断半抗原与载体是否偶联成功；另一方面是定量测定结合比和蛋白质含量等。判断是否偶联成功最简单的方法为紫外扫描法，如果人工抗原的紫外吸收特征兼具有或不同于原半抗原和载体蛋白的紫外吸收特征，则可初步判断偶联成功。

发明内容

本发明目的是建立一种以溴氰菊酯为原料，通过分解、酰氯化、再合成等反应制备半抗原，以获得对拟除虫菊酯类农药特异性强亲和力高的抗体。

本发明实施例的另一目的在于提供一种α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯半抗原合成方法，其特征在于，该合成方法包括以下步骤：

溴氰菊酯的分解；

二溴菊酸酰氯的合成：

3-苯氧基苯乙醇酸的合成；

1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-2’，2’一二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯的合成；

半抗原Hp的合成；

免疫抗原用重氮化法合成人工抗原。

进一步，溴氰菊酯的分解的实现方法包括以下步骤：

将溴氰菊酯15.4克加入到烧瓶中，再加入150ml 1mol/L氢氧化钠和150ml60％的四氢呋喃，混合物回流3天；并用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，然后洗净，硫酸镁干燥，减压浓缩；使用硅胶柱层析纯化，乙酸/石油醚/乙酸乙酸；10∶89.5∶0.5，得到二溴菊酸和3-苯氧基苯甲氰醇。

进一步，二溴菊酸酰氯的合成的实现方法包括以下步骤：

称取二溴菊酸3g，置于50mL两口圆底烧瓶中，然后向烧瓶中加入9ml CHCl₃和1uLDMF，然后立即加入2.1mL氯化亚砜(SOCl₂)，将盛有混合反应物的烧瓶置于油浴锅中，60-65℃搅拌反应95min，反应完成后将反应混合物的溶剂蒸发干净，然后在剩余浓缩物质中加入5mL正己烷，再次将反应溶液蒸发干燥后得到淡黄色油状物二溴菊酸酰氯，直接用于下一步反应。

进一步，3-苯氧基苯乙醇酸的合成方法为：