[发明专利]拟除虫菊酯类α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯的半抗原合成方法

权利要求书

1.一种α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯半抗原合成方法，其特征在于，该合成方法包括以下步骤：

溴氰菊酯的分解；

二溴菊酸酰氯的合成：

3-苯氧基苯乙醇酸的合成；

1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-2’，2’一二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯的合成；

半抗原Hp的合成；

免疫抗原用重氮化法合成人工抗原。

2.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，溴氰菊酯的分解的实现方法包括以下步骤：

将溴氰菊酯15.4克加入到烧瓶中，再加入150ml 1mol/L氢氧化钠和150ml60％的四氢呋喃，混合物回流3天；并用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，然后洗净，硫酸镁干燥，减压浓缩；使用硅胶柱层析纯化，乙酸/石油醚/乙酸乙酸；10∶89.5∶0.5，得到二溴菊酸和3-苯氧基苯甲氰醇。

3.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，二溴菊酸酰氯的合成的实现方法包括以下步骤：

称取二溴菊酸3g，置于50mL两口圆底烧瓶中，然后向烧瓶中加入9ml CHCl₃和1uLDMF，然后立即加入2.1mL氯化亚砜(SOCl₂)，将盛有混合反应物的烧瓶置于油浴锅中，60-65℃搅拌反应95min，反应完成后将反应混合物的溶剂蒸发干净，然后在剩余浓缩物质中加入5mL正己烷，再次将反应溶液蒸发干燥后得到淡黄色油状物二溴菊酸酰氯，直接用于下一步反应。

4.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，3-苯氧基苯乙醇酸的合成方法为：

称取3.0g 3-苯氧基苯甲氰醇，约13mmol，置于三角瓶中，加入20mLCH₂Cl₂将其溶解，冰浴磁力搅拌状态下向溶液中慢慢滴加6mL浓HCl，搅拌反应2h，旋转蒸发溶剂，将所得产物溶于20mL CH₂Cl₂装入分液漏斗，加入20mL水，振荡分液漏斗，出现大量白色沉淀，收集并干燥白色沉淀，得2.8g产物；将所得产物溶于适量无水乙醇，加入过量的5mol/L NaOH溶液，40℃搅拌反应过夜，在瓶口放置pH试纸检测碱性气体的生成，待碱性气体不再产生终止反应；向反应混合液中慢慢滴加浓HCl，出现大量白色沉淀，过滤干燥，收集白色沉淀。

5.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-2’，2’一二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯的合成方法为：

称取1.0g 3-苯氧基苯乙醇酸，置于50mL圆底烧瓶中，加入5mL丙酮将其溶解。将上述合成的二溴菊酸酰氯溶于5mL丙酮，冰浴磁力搅拌状态下将酰氯一次性加到烧瓶中，然后加入0.5ml三乙胺，慢慢升温至室温，继续反应2-4h；反应完成后，将反应物过滤，蒸干溶剂，3mol/L HCl酸化；20mL水洗一次，乙酸乙酯萃取，硅胶柱层析纯化，乙酸乙酯/正己烷/乙酸＝1∶9∶0.1，得白色固体0.43g。

6.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，半抗原Hp的合成方法为：

将合成的1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-(2’，2’-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯合成酰氯，溶进4mL 1，4-二氧六环，置4℃冰箱冷却，得A液；称取B-丙氨酸1.0g，约19mmol，溶进4mL 4mol/L NaOH溶液，置4℃冰箱冷却，得B液；另取3mL4mol/LNaOH溶液，置4℃冰箱冷却，得C液，将A液与C液均分成5等份，每间隔5分钟向B液中同时各加入1份，整个反应置冰水浴中，磁力搅拌下进行。加样全部完成后反应过夜，用50mL乙醚冲洗反应液，用浓盐酸调节反应终液的pH值为4，目标产物用乙酸乙酯萃取；无水Na₂SO₄干燥，所得物减压蒸馏浓缩。硅胶柱层析纯化，乙酸乙酯/石油醚＝4∶1，得淡黄色油状物，采用核磁共振谱(¹H-NMR)法鉴定半抗原结构。

7.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，免疫抗原用重氮化法合成，具体操作步骤如下：

称取40mg半抗原Hp溶于1mL 1mol/L Hcl，可以加入一点二氯甲烷助溶，冰浴搅拌状态下加入0.3mL DMF，然后缓慢向反应体系中滴加0.5mL 1％亚硝酸钠溶液，室温搅拌反应10min，此即重氮化步骤；重氮化完成后，将溶液缓慢滴加到BSA，50mg溶于10mLPBS，溶液中，冰浴搅拌反应30min，然后置4℃冰箱缓慢反应过夜，将反应终液置透析袋内，于0.01mol/L pH7.4的PBS溶液中4℃搅拌透析，每4.8小时换一次透析液，共透析3天；透析结束后将透析袋中的蛋白溶液，即为溴氰菊酯人工抗原Hp-BSA，分成若干等份分装于1mL离心管中，于-20℃冰箱中存放备用。