[发明专利]金属螯合法制备固定化果胶酶

权利要求书

1.一种固定化果胶酶的制备方法，其反应如下：

其具体步骤为：

①将水浮选好的硅胶加入到1∶1的盐酸中加热活化，产物水洗，于90℃下烘干，备用。

②将用固体NaOH调节PH为11的螯合剂IDA溶液转移到圆底烧瓶中，利用冰浴使温度降到0℃，用移液管量取偶联剂硅烷偶联剂GLYMO，在电磁搅拌下慢慢的滴加入反应液中，加热搅拌反应，反应后得到淡黄色的澄清的透明的液体即为GLYMO-IDA，用浓盐酸调节PH到6，转移到密封的容器中，放入冰箱中保存。

③将活化的硅胶加入用0.2mol/l的CH₃COONa调节PH5.5的溶液中并加热，再加入GLYMO-IDA产物，回流反应，得到产物即为硅胶-GLYMO-IDA，水洗，备用。

④用ZnSO4溶液对硅胶-GLYMO-IDA加载Zn²⁺，得到产物硅胶-GLYMO-IDA-Zn²⁺，用大量的水洗，离心，备用。

⑤将硅胶-GLYMO-IDA-Zn²⁺和果胶酶加入到磷酸盐调节PH为7.0的溶液中，反应后得到的产物即为硅胶-GLYMO-IDA-Zn-果胶酶，用磷酸缓冲液洗，水洗，NaCl洗，水洗，冷藏备用。

2.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在于，步骤①所述硅胶的活化是在1∶1盐酸中120℃回流4h。

3.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在于，步骤②所述螯合剂为亚氨基二乙酸，偶联剂为硅烷偶联剂3-(2，3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷、γ-氨丙基3乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷，加热搅拌温度为65℃，反应时间为4～8h。

4.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在于，步骤③所述加热温度为95℃，回流时间为2h。

5.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在于，步骤④所述Zn²⁺加载反应时间为1～4h。

6.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在于，步骤⑤所述反应温度为室温，反应时间为4～6h。