[发明专利]一种检测甘蓝型油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因的分子标记方法

权利要求书

1.一种检测甘蓝型油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R的分子标记引物，其特征在于：

正向引物序列AP15F：5’-CTTTCGCTAGCAGGGCTAAA-3’

反向引物序列AP18R：5’-CATCTTTGAAAGTGCCACAAC-3’ 

反向引物序列AP19R：5’- CATCTTTGAAAGTGCCACAAT-3’。

2.权利要求1所述引物用于检测甘蓝型油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R的方法，其特征在于：

(1) 甘蓝型油菜植株基因组DNA的提取，

(2) 将权利要求1所述的3条分子标记引物AP15F/AP18R、AP15F/AP19R分别加入2个PCR反应体系，并对甘蓝型油菜种质资源或育种群体植株的DNA 进行扩增；

PCR反应体系包括: 10 ng/μL DNA模板2.0μL，10 μmol /L引物各2. 0 μL，10×酶反应缓冲液2 μL，25mmol/ L MgC1₂1.2 μL，2.5 mmol/ L dNTP1.6 μL，5 U/L Taq酶0.1 μL，加水至20 μL；

PCR反应程序为94^oC预变性5 min，94^oC变性30 s，60^oC退火30 s，72^oC延伸1 min，共35个循环；然后72 ^oC 延伸5 min，12 ^oC 冷却10 min后，将扩增产物加上样缓冲液终止反应；

(3) 扩增产物在质量比浓度为1.2%的琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察、记载：

如果引物对AP15F/AP18R扩增产物有828bp特征条带而AP15F/AP19无特征条带，则为不含抗除草剂基因BnALS1R的纯合体；如果引物对AP15F/AP18R扩增产物无特征条带而AP15F/AP19有828bp特征条带，则为含抗除草剂基因BnALS1R的纯合体；如果2个引物对AP15F/AP18R、AP15F/AP19扩增产物都有828bp特征条带，则为含有抗除草剂基因BnALS1R的杂合体。