[发明专利]一种高产苯乙醇的大肠杆菌工程菌株及其应用有效
| 申请号： | 201210276491.3 | 申请日： | 2012-08-03 |
| 公开（公告）号： | CN102851253A | 公开（公告）日： | 2013-01-02 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;张传志;堵国成;康振;关泽宇 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/22;C12R1/19;C12R1/84;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人： | 王秀丽 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 乙醇 大肠杆菌 工程 菌株 及其 应用 | ||
1.一种高产苯乙醇的大肠杆菌工程菌株，其特征在于表达毕赤酵母（Pichia pastorisGS115）苯丙酮酸脱羧酶以及酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）乙醇脱氢酶。
2.权利要求1所述的工程菌株，其特征在于所述表达为单独表达或串联表达。
3.权利要求1所述工程菌株的构建方法，其特征在于以高产苯丙氨酸的大肠杆菌为出发菌株，利用表达载体pCL1920表达来源于毕赤酵母以及酿酒酵母中苯乙醇合成途径的两个酶KDC、ADH1，获得高产苯乙醇的大肠杆菌工程菌株。
4.权利要求1所述工程菌株发酵法生产苯乙醇的方法，其特征在于工程菌株活化后，按10%(v/v)的接种量接入发酵培养基中，发酵温度33°C，摇床转速200r/min，当菌体生长至OD610为1.5-2.0时，迅速转至38°C摇床，继续培养至48h。
5.权利要求4所述的方法，其特征在于发酵培养基配方为：（g/L）：葡萄糖35，(NH4)2SO45，KH2PO43，MgSO4·7H2O3，NaCl1，Na-Citrate1.5，CaCl2·2H2O 0.015，FeSO4·7H2O 0.1125，Thiamine-HCl0.075，L-Tyr0.4，蛋白胨4，酵母粉2，Kan0.04，微量元素营养液(TES)1.5mL/L，pH6.8±0.1；12g/L CaCO3用于调节pH；装液量为50mL/250mL；
TES(g/L)：Al2(SO4)3·18H2O2.0，CoSO4·7H2O0.75，CuSO4·5H2O2.5，H3BO30.5，MnSO4·7H2O24，Na2MoO4·2H2O3.0，NiSO4·6H2O2.5，ZnSO4·7H2O15。
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