[发明专利]鉴定阿胶真伪的引物、试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药检测领域，特别涉及鉴定阿胶真伪的引物以及试剂盒，还包括该试剂盒的检测方法。

背景技术

胶类药材是指用动物的皮、鳞、骨骼等，经过熬制后以胶入药的一类中药，常用的有阿胶，黄明胶，龟甲胶，鹿角胶，新阿胶，鱼鳞胶等。胶类药材是中国所特有的，并有悠久的应用历史，多有补血止血，滋阴润燥等补益功效。然而，各种胶类药材原料来源不同，加之用药部位的不同，因此各种胶类药材在成分、药理作用、临床应用上亦有各自的特点。然而目前不仅存在胶类药材混用，还存在胶类药材掺杂、掺假的现象，尤其以阿胶最为严重。

2002年2月28日，卫生部发布了《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》，规定了阿胶被列为既是食品又是药品。由此，在国家药监局进行注册的药品使用的阿胶类药品有10种，而大大小小的阿胶类食品和保健品，也应运而生，导致阿胶长久以来作为药品的这一定位开始发生改变——作为食品。阿胶在《中国药典2010》有相关质量规定：以驴皮熬制的胶为阿胶正品，但作为食品和保健品，目前还没有国家标准。

当前市场上阿胶的制备原料鱼龙混杂，其中不乏使用驴的近亲源物种马及骡子的皮熬制的胶，加之由于保健品没有相关国家标准，阿胶的监管目前并不明朗，而作为食品阿胶的标准，则由企业自行制定，这也给阿胶造假提供了较大的空间。由于驴、马、骡同是马科动物，其皮成胶需经过长时间的煮制，加之制作工艺中会加入其他辅料，导致这些使用驴近亲源性动物皮冒充驴皮熬制的胶类药材从外观上较难辨认，造成检测难度极大。另一方面，由于目前驴皮原料的短缺，并且骡子皮熬制的胶在外观上与驴皮熬制的阿胶极为相近，骡子皮成为了许多阿胶产品的掺假原料。

近年来，公开号为CN1605868A的中国专利采用PCR-RFLP方法鉴定包括驴皮等动物皮，但该方法适合用于DNA保存完好，或者轻度破坏样品的PCR鉴定。阿胶经过高温高压长时间作用，其DNA含量极少，片段极短，很难扩增出长片段的PCR产物。另外，公开号为CN101974635A的中国专利公开了PCR方法鉴别阿胶的真伪和公开号为CN101812509A的中国专利公开了鉴定中药中马种源性成分的PCR鉴定方法。但这些方法未能鉴别与驴亲源性最近的骡子皮掺假的阿胶。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供鉴定阿胶真伪的引物的引物，其特异性好，灵敏度高，能适应较宽的温度范围。

为实现上述发明目的，技术方案为：

鉴定阿胶真伪的引物，所述引物由上游引物和下游引物组成，所述上游引物如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，所述下游引物如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

本发明的目的之二在于提供鉴定阿胶真伪的试剂盒，技术方案为：

含有所述引物为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所述核苷酸序列的PCR检测试剂盒。

本发明的试剂盒中还包含有PCR聚合酶、dNTPs、缓冲液、MgCl₂和双蒸水。

本发明的目的之三在于提供鉴定阿胶真伪的方法，鉴定方法简单，技术方案为：

利用所述试剂盒鉴定阿胶真伪的方法，包括如下步骤：

a.取阿胶样品，提取DNA，备用；

b.根据马线粒体DNA序列设计引物，然后以步骤a制备的DNA为模板进行PCR扩增，得PCR扩增产物；

c.将步骤b所得PCR扩增产物进行电泳鉴定，如果PCR扩增产物呈阳性，表明阿胶含有近亲源性动物皮。

优选的，所述步骤b中，所述引物由上游引物和下游引物组成，所述上游引物如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，所述下游引物如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。  

优选的，所述步骤c中，所述近亲源性动物皮为马皮或骡子皮。    

优选的，所述步骤b中，所述PCR扩增的退火温度为45-58℃。

更优选的，所述PCR扩增的条件为：94 ℃预变性6 min；94 ℃变性30 s，45-58℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35 个循环；然后在72 ℃后延伸7 min。