[发明专利]利用基因芯片进行不同疾病检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，特别是涉及一种利用基因芯片进行不同疾病检测的方法。

背景技术

基因芯片是人类基因组计划带来的最具应用价值的科研成果，它融合了生命科学、化学、微电子技术、计算机科学、统计学和生命信息学等多种学科的最新技术。随着微加工技术的发展，高密度寡核苷酸芯片最高密度可达上百万个探针，因此，基因芯片通量水平并不受芯片技术本身制约，而是受样本的处理和基因芯片设计方法的限制。基因芯片作为一种高通量的、先进的分子生物学技术，可应用于疾病基因表达变化的检测，其具有高度的灵敏性和准确性、快速便捷、并可同时检测多个基因表达变化等优点。

利用基因芯片技术，开发一种快速检测不同疾病的方法，有利于对不同疾病，尤其是癌症的早期进行有效诊断，降低死亡率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用基因芯片进行不同疾病检测的方法。通过该方法，可对不同疾病进行有效检测，以提高治愈率，降低死亡率。

为解决上述技术问题，本发明的利用基因芯片进行不同疾病检测的方法，包括步骤：

(1)抽提待测样品（包括血液样本）的总RNA，纯化总RNA；

(2)反转录合成cDNA，标记cRNA的合成、纯化；

(3)cRNA片段化；

(4)与带有疾病相关基因检测探针的基因芯片进行杂交，洗涤，芯片扫描，检测杂交反应的结果。

所述步骤(2)中，标记采用荧光素标记、生物素标记、电化学发光标记、放射性元素标记或酶标记，优选生物素标记。

所述步骤(4)中，杂交温度为25℃～72℃，杂交时间为1分钟～18小时，优选45℃杂交

16小时。

本发明操作简单，通量水平更高，费用低廉，同时，可为不同疾病，尤其是癌症的发生发展早期进行有效诊断，以提高治愈率，降低死亡率，具有良好的临床应用前景。

附图说明

下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：

图1是实施例中的贴膜示意图；

图2是实施例中的扫描图像示意图；

图3是实施例中的不同样本的K-Means聚类分析结果图，其中，1-4为正常人、5-7为肝癌患者，8-10为肝炎患者，11-13为肠癌患者；

图4是实施例中的不同样本的主成分分析结果（PCA）图。

具体实施方式

以下实施例中使用的TRIzol试剂、PCR试剂等采用商业产品，具体操作按照说明书进行。其他未注明的实验操作，可按照常规分子生物学操作方法进行。

实施例1

一、第一链cDNA合成

1、样品：4个正常人、3个肝癌患者、3个肝炎患者、3个肠癌患者的静脉血。其中，正常人、肝癌、肝炎、肠癌的诊断标准，依据临床标准。

调整总RNA的浓度到83ng/μL。其中，静脉血的总RNA的抽提采用TRIzol法，总RNA的纯化可采用商业化的试剂盒进行。

2、制备Poly-A RNA质控

A、第一次稀释：加2μL of the Poly-A Control Stock到38μLof Poly-A Control Dil Buffer中（1:20）。混匀，轻甩。收集液体到管底。

B、第二次稀释：加2μL第一次的稀释液到98μL of Poly-A Control DilBuffer中（1:50）。混匀，轻甩。收集液体到管底。

C、第三次稀释：加2μL第二次的稀释液到98μL of Poly-A Control Dil Buffer中（1:50）。混匀，轻甩。收集液体到管底。

D、第四次稀释：加40μL第三次的稀释液到120μL of Poly-A Control Dil Buffer中（1:4）。混匀，轻甩。收集液体到管底。

3、按下表1配制一链反应混合液

表1

4、分装7μL上述混合液至反应管中。

5、加3μL浓度调整到83ng/μL的总RNA到上述步骤4的反应管中。

6、轻柔混和，瞬时离心后，42℃孵育2小时。

7、孵育结束后，瞬时离心收集液体至管底，把样品放在冰上，立即进行第二链合成。

二、第二链cDNA合成

1、按照下表2准备Second-Strand Master Mix：

表2

2、加20μL以上混合液到所有的反应管中，至总体积30μL，混匀。