[发明专利]一种类志贺邻单胞菌的快速诊断方法有效
| 申请号： | 201210262462.1 | 申请日： | 2012-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN102827928A | 公开（公告）日： | 2012-12-19 |
| 发明（设计）人： | 孟双;徐建国;叶长芸 | 申请（专利权）人： | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京市颐合律师事务所 11383 | 代理人： | 李新军 |
| 地址： | 102208 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种类 志贺邻单胞菌 快速 诊断 方法 | ||
1.一种检测类志贺邻单胞菌的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)将待检测样本、序列如SEQ ID NO 1-2所示的一对外引物、序列如SEQ ID NO 3-4所示的一对内引物、序列如SEQ ID NO 5-6所示的一对环引物、dNTP、Bst DNA聚合酶、MgSO4、甜菜碱以及环介导等温扩增缓冲液加入到反应容器中；
(2)将步骤(1)所得的混合液放置于65℃恒温环境中进行DNA扩增反应；
(3))将步骤(2)获得的产物放置于80℃恒温环境中，以终止步骤(2)所述的DNA扩增反应；
(4)检测步骤(3)获得的产物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述MgSO4的浓度为6mM，所述甜菜碱的浓度为10mM。
3.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待检测样本为DNA提取物。
4.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的DNA扩增反应时间为1小时。
5.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的终止反应时间为5分钟。
6.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述的检测方法可以是电泳检测法、浊度检测法、或染色检测法。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述染色检测使用的染料为SYBR green I荧光染料。
8.一种检测类志贺邻单胞菌的试剂盒，所述试剂盒包括：序列如SEQID NO 1-2所示的一对外引物、序列如SEQ ID NO 3-4所示的一对内引物、序列如SEQ ID NO 5-6所示的一对环引物、dNTP、Bst DNA聚合酶、MgSO4、甜菜碱、环介导等温扩增缓冲液。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述MgSO4的浓度为6mM，所述甜菜碱的浓度为10mM。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA提取试剂盒。
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