[发明专利]大分子磷脂酰甘油纳米脂质体、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的制备和应用。属于脂质体的制备及应用技术。

背景技术

脂质体作为药物载体是临床应用较早，发展最为成熟的一类新型靶向制剂；它是由脂双分子层组成的颗粒，可介导基因穿过细胞膜，又是一种优良的基因和药物载体。脂质体应用非常广泛，制备工艺简单、方法多样，其粒子大小处于纳米级的介观范围，有许多独特的物理、化学性质，粒径还可根据需要进行控制；可用于纳米粒子的制备、临床检验和诊断、催化反应的控制、模拟膜研究及在体内外将基因或其它物质向细胞内传递等。

但是目前的小分子脂质体技术依然存在如物理化学稳定性差，囊泡易发生融合聚集，药物易泄漏；不易进行表面修饰等缺点。利用高分子物质替代磷脂所制备的高分子脂质体可提高脂质体的物理化学稳定性，其不仅具备小分子脂质体的脂质双层膜结构，且制备方法简单，稳定性高，易进行表面修饰。但是阳离子高分子脂质体仍然存在不少缺点，如细胞毒性偏大、正电性偏高所导致的盐溶液中的不稳定特性等，因此有必要开发一种更加稳定、低毒性的高分子脂质体系统。大分子磷脂酰甘油纳米脂质体则属于中性脂质体的范畴，具有低毒性、高稳定性的优点。

发明内容

本发明的目的是提供一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，它具有脂质体的优点，同时具有高分子物质特有的多功能和稳定性，可满足上述应用对脂质体的要求。

本发明为一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征在于所述的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体是用双亲性磷脂酰甘油壳聚糖作为主膜材来代替合成磷脂，小分子磷脂为稳定剂所制备的具有脂质双层膜结构的囊泡。

本发明中用于制备大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的磷脂酰甘油壳聚糖的具体特征为：重均分子量大于2000，可溶于极性有机溶剂氯仿或二氯甲烷，并含有羧基或氨基。

本发明中的小分子磷脂包括胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺（DOPE）、3β-［N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基］胆固醇、卵磷脂、磷脂（PC、PE、PS、PI、PG）、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或2-3种，优选为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺或3β-［N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基］胆固醇。

本发明提供的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的制备方法为用于制备脂质体的所有方法，包括薄膜分散法、反向蒸发法、复乳法、离心法、pH梯度法、注入法和混溶法。

其中薄膜分散法和反向蒸发法的基本步骤为：先将磷脂酰甘油壳聚糖和小分子磷脂及油溶性物质共溶于氯仿或其它有机溶剂中，混匀得溶液Ⅰ；然后配置含有水溶性物质的水溶液Ⅱ。薄膜分散法为：将溶液Ⅰ通入氮气并除去有机溶剂使成薄膜；用水溶液Ⅱ超声使脂质薄膜水化；反向蒸发法为：将溶液Ⅰ与水溶液Ⅱ共混超声乳化，再除去有机溶剂。最后全部采用柱过滤法、离心法或透析法进行纯化。

具体大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的制备流程如下：

(a)先制备磷脂酰甘油壳聚糖：取100mg磷脂酰甘油(PG)溶于50mL DMSO中，共混于pH=6的硼酸缓冲液50mL后，加入4.0mg四氟硼酸锌作为催化剂，再加入组织交联剂Denacol EX521(质量浓度1%-50%)溶液10ml，搅拌反应24小时后，萃取收集反应产物环氧化物修饰的PG；将环氧化物修饰的PG与氧羧甲基壳聚糖在pH=6硼酸缓冲液中再进行反应24小时，透析48小时后冻干得磷脂酰甘油壳聚糖。

(b)将磷脂酰甘油壳聚糖和小分子磷脂及油溶性物质共溶于氯仿或其他有机溶剂中，混匀；

(c)将步骤b)中得到的混合溶液通入氮气并除去有机溶剂使成薄膜，然后加入含有水溶性物质的水溶液使脂质水化；或将含有水溶性物质的水溶液与步骤b)得到的混合溶液共混超声乳化，再除去有机溶剂。

本发明所述的水溶性、油溶性或双亲性物质包括药物、蛋白、抗体、基因、维生素、磁性颗粒、量子点、SiO₂、磷酸钙无机颗粒，其中优选为抗肿瘤药物紫杉醇、顺铂、阿霉素，RB基因和p53基因，维生素C，Fe3O4磁性纳米颗粒，CdSe量子点，SiO₂纳米球。