[发明专利]皱纹盘鲍基因组DNA的无损伤提取方法无效
| 申请号： | 201210256671.5 | 申请日： | 2012-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN102747069A | 公开（公告）日： | 2012-10-24 |
| 发明（设计）人： | 刘小林;刘明泰;常亚青;李杨;李丹;许淑芬;李旭光;张艳 | 申请（专利权）人： | 大连海宝渔业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人： | 田和穗 |
| 地址： | 116045 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 皱纹 基因组 dna 损伤 提取 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种皱纹盘鲍基因组DNA的无损伤提取方法，其特征在于包括以下步骤：
a、使用沾有70%-75%酒精的棉球对皱纹盘鲍的外套膜进行消毒和刺激，将处理后的皱纹盘鲍腹面朝上静置，待分泌粘液后，刮取0.1-0.2g粘液和表皮组织碎片的混合物，将该混合物中加入无水乙醇固定，冰上静置5-10分钟后，离心分离，取沉淀；
b、所得沉淀中加入细胞裂解液，震荡混匀；
c、在上步中获得的混合样品中加入6μl-20μl，5mg/ml-10mg/ml的蛋白酶K，在65℃的条件下消化3-5小时，且每15分钟震荡一次，消化完成后在4℃条件下冷却10-20分钟；
d、在冷却后的样品中加入7.5M/L的NH4Ac，加入的体积为样品总体积的 ，冰上静置5-10分钟后，4℃条件下离心，取上清液；
e、在所得的上清液中加入与其体积相同的异丙醇，充分震荡混匀，冰上静置2-5分钟后，离心取沉淀；
f、所得沉淀用70%-75%的乙醇洗涤两次，室温下晒置5-10分钟，获得皱纹盘鲍基因组DNA。
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