[发明专利]用于检测ALK- 1基因突变的引物组、该引物组的用途及包含该引物组的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及引物，具体涉及用于检测ALK-1基因突变的引物组，本发明还涉及该引物组的用途，以及包含该引物组的试剂盒。

背景技术

活化素受体激酶1（activin receptor type Ⅱ-like kinase-1,ALK-1也称为ACVRL1）位于12q11-q14，含10个外显子，基因组全长约15kb+。它突变能引起遗传性出血性毛细血管扩张症（hereditary hemorrhagic telangiectasia HHT）或遗传性肺动脉高压（heritable pulmonary arterial hypertension PAH）。有些突变携带者同时具有两种病症。HHT是一种常染色体显性遗传性出血性疾病，以皮肤黏膜多发性毛细血管扩张伴反复出血为特征，临床上一般可分为Ⅰ型HHT和Ⅱ型HHT两种表型。其中Ⅱ型HHT由ALK-1基因突变引起，HHT-Ⅱ最常见的临床表现为反复的自发性出血或轻度创伤出血，以鼻出血最常见，而临床处理却非常棘手。

肺动脉高压是各种原因引起的静息状态下右心导管测得的肺动脉平均压（mean pulmonary arterial pressure，mPAP）≥25mmHg的一组临床病理生理综合征。肺动脉高压可以作为一种疾病而独立存在，更常见的是很多疾病进展到一定阶段的病理生理表现。由于肺血管重塑引起肺循环血流动力学改变，最终可导致右心衰竭，甚至死亡。这是一种极度恶性的疾病，七成多患者是年轻人，几乎每个人都知道癌症预后差，但没有人知道肺动脉高压室一种极度恶性疾病，它的病因复杂、发病率高、误诊率高、危害性强，其愈后是灾难性的，可以说，这种病就是心血管疾病中的癌症。这种疾病平均发病年龄是36岁，75%患者集中于20-40岁年龄段，还有15%患者年龄在20岁以下，几岁的孩子也会发病。世界上该病的发病率在1×10^-5～1×10^-6之间，其中约6%为家族性的。

目前，ALK1基因突变的肺动脉高压患者患病年龄比骨形成蛋白2（BMPR2）基因突变的患者更加年轻化，一旦发病进展更加迅速，更加凶险。因此采用DNA检测寻找ALK-1基因突变有助于查清病因，识别家系中高风险的成员，以及未出生孩子的患病风险，这对提高人口素质，优生优育有重要的意义。对临床上指导用药，寻找病因，基因评估等具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用于检测ALK-1基因突变的引物组。

ALK-1基因的第1到第10外显子区，3’UTR和启动子中的任意一个区域在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变，都视为ALK-1基因发生了突变。因而，根据ALK-1基因第1到第10外显子区，3’UTR和启动子序列分别设计出能专一性鉴别ALK-1基因是否突变的特异性引物组。可通过PCR扩增和测序测定ALK-1基因上述区域是否发生改变，以鉴定ALK-1基因是否发生突变。因此，本发明的用于检测ALK-1基因突变的引物组可以是ALK-1基因第1到第10外显子区、3’UTR和启动子中任一区域对应的引物组。

本发明第一个目的提供的用于检测ALK-1基因突变的引物组，包括ALK-1基因第1到第10外显子区，3’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组，即选自ALK-1基因第1到第10外显子区、3’UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组，具体地，所述引物组选自ALK-1基因的第1外显子区(Exon1)的PCR扩增引物组、第2外显子区(Exon2)的PCR扩增引物组、第3外显子区(Exon3)的PCR扩增引物组、第4外显子区(Exon4)的PCR扩增引物组、第5外显子区(Exon5)的PCR扩增引物组、第6外显子区(Exon6)的PCR扩增引物组、第7外显子区(Exon7)的PCR扩增引物组、第8外显子区(Exon8)的PCR扩增引物组、第9外显子区(Exon9)的PCR扩增引物组、第10外显子区(Exon10)的PCR扩增引物组、3’UTR的PCR扩增引物组和启动子的PCR扩增引物组中的任意一组，所述的上述各PCR扩增引物组为表1所示。

表1：ALK-1基因PCR扩增引物序列

本发明所述的引物组还包括ALK-1基因第1到第10外显子区、3’UTR和启动子中任一区域对应的PCR测序引物组，具体地，所述引物组包括选自ALK-1基因第1到第10外显子区、3’UTR和启动子分别对应的PCR测序引物组中的任意一组。