[发明专利]一种蛋白质原位表达芯片及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种蛋白质原位表达芯片，所述芯片包括固定有捕获载体的基底和粘合在基底上的流通池，所述基底上分布有至少一个与表达捕获载体相结合的蛋白质，所述蛋白质通过在芯片上原位表达，并干燥后获得；所述流通池的两端分别设有流通池入口和流通池出口，优选地，通过洗耳球或压缩空气干燥，更优选地，所述基底由金片制成。

2.根据权利要求1所述的蛋白质原位表达芯片，其特征在于，所述蛋白质通过点样仪将用于表达与捕获载体相结合的蛋白质的核酸分子分布于基底上，再无细胞表达裂解液通入流通池中进行原位表达，获得与捕获载体相结合的蛋白质。

3.根据权利要求1所述的蛋白质原位表达芯片，其特征在于，所述蛋白质通过微流控模板分布将用于表达与捕获载体相结合的蛋白质的核酸分子分布于基底上，再进行原位表达获得；优选地，所述微流控模板为设有至少一个微流凹槽的微流控模板或点状微流控模板，所述微流凹槽的两端分别设有流体出口和流体入口，所述微流控模板的微流凹槽与所述芯片形成微流通道。

4.根据权利要求3所述的蛋白质原位表达芯片，其特征在于，所述蛋白质通过包括以下步骤的方法分布于基底上：将所述用于表达与捕获载体相结合的蛋白质的核酸分子通入微流控模板中，使用于表达与捕获载体相结合的蛋白质的核酸分子分布于基底上，然后去掉微流控模板，再将无细胞表达裂解液装载于流通池中，使所述核酸分子进行原位表达获得与捕获载体相结合的蛋白质；

或将用于表达与捕获载体相结合的蛋白质的核酸分子和无细胞表达裂解液同时通入微流控模板中，进行原位表达反应后，使与捕获载体相结合的蛋白质分布于基底上，再去掉微流控模板。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的蛋白质原位表达芯片，其特征在于，所述无细胞表达裂解液为原核细胞表达裂解液或真核细胞表达裂解液，优选地，所述原核细胞表达裂解液为大肠杆菌表达裂解液，优选地，所述真核细胞表达裂解液为兔网织红细胞表达裂解液、麦胚表达裂解液或昆虫细胞表达裂解液；

更优选地，当无细胞表达裂解液为原核细胞表达裂解液时，无细胞表达裂解液所用的模板需要的原件包括启动子、依赖于核糖体结合位点、起始密码子ATG和模板序列的3’端需含有终止密码子，最更优选地，所述启动子为T7启动子，所述核糖体结合位点为AGGAGG；或

当无细胞表达裂解液为真核细胞表达裂解液时，无细胞表达裂解液所用的模板需要的原件包括启动子、起始密码子ATG和模板序列的3’端需含有终止密码子，最优选地，所述启动子为T7启动子、SP6启动子或T3启动子。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的蛋白质原位表达芯片，其特征在于，所述捕获载体选自抗体、蛋白质、小分子、多肽和核酸分子中的一种或多种，优选地，所述核酸分子表达的蛋白上含有标签，所述标签选自酶、多肽结合位点、特异识别多肽的肽段、识别金属螯合的肽段和识别生物素链霉素的肽段中的一种或多种；更优选地，所述核酸分子为DNA分子和/或RNA分子。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的蛋白质原位表达芯片的制备方法，所述方法包括制备基底和与其通过粘合剂粘合的流通池，使蛋白质通过原位表达分布在基底上，再将其干燥后，即得。