[发明专利]一种基因工程细胞及其在NK细胞扩增中的应用有效
| 申请号： | 201210237023.5 | 申请日： | 2012-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN102911918A | 公开（公告）日： | 2013-02-06 |
| 发明（设计）人： | 朱诗国;王艳丽 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙) 31218 | 代理人： | 翟羽;施春花 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因工程 细胞 及其 nk 扩增 中的 应用 | ||
1.一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-GEC，其细胞膜表面稳定表达4-1BB配体和膜固定IL-21。
2.根据权利要求1所述的一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-K562细胞。
3. 权利要求1所述的基因工程细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）构建4-1BBL表达的转座子；
（2）4-1BBL转座子与转座酶SB11共转染相应细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达细胞4-1BBL-GEC；
（3）在步骤（2）获得的4-1BBL-GEC基础上导入在细胞膜表面稳定表达的IL-21，建立4-1BBL-mbIL-21-GEC。
4.根据权利要求3所述的基因工程细胞的制备方法，其特征在于，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-K562细胞。
5. 权利要求1或2所述的基因工程细胞在NK细胞扩增中的应用。
6. 一种NK细胞扩增方法，其特征在于，利用权利要求1所述基因工程细胞进行扩增，包括以下步骤：
（1）构建4-1BBL表达的转座子；
（2）4-1BBL转座子与转座酶SB11共转染相应细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达的细胞4-1BBL-GEC；
（3）在步骤（2）获得的4-1BBL-GEC 基础上导入在细胞膜表面稳定表达的IL-21，建立4-1BBL-mbIL-21 -GEC；
（4）致死性照射或丝裂霉素处理步骤（3）获得的基因工程细胞，按2: 1与外周血单核细胞混合，在NK细胞扩增培养液中共培育；
（5）每周重复刺激1次，连续数周，以获得足够量的NK细胞。
7. 根据权利要求6所述的一种NK细胞扩增方法，其特征在于，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-K562细胞。
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