[发明专利]一种喷鼻黏膜免疫疫苗组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种喷鼻黏膜免疫疫苗组合物及其制备方法。

背景技术

近年来，SARS、高致病性H5N1禽流感、甲型H1N1流感等病原黏膜感染性疾病的危害日趋严峻。众所周知，全球近20年新发、突发重大传染病多为黏膜感染所致，且普遍易感，难以控制。此外，生态环境变化、传病虫媒孽生、抗生素滥用、病原体变异、超级细菌及超级病毒出现等原因，一些被控制的传染病又呈死灰复燃，极易造成重大传染病暴发流行。因此WHO权威人士预言，人类将面临传染病的严重威胁。

众所周知，95%以上的病原体感染发生在黏膜或由黏膜入侵而致病。黏膜系统广泛分布在呼吸道、消化道和泌尿生殖道，以及外分泌腺，而呼吸道占首位。该系统在体内的覆盖面积大，形成机体抵抗外来病原体入侵的第一道防线，特别是黏膜免疫模拟自然感染诱导产生分泌性IgA和CTL效应及全面免疫应答在抗感染免疫中发挥重要作用，且各黏膜间具有相通性。然而，现注射免疫疫苗途径通常只能激发系统免疫应答,而无黏膜免疫应答及交叉免疫保护作用，使得疫苗品种、类型单一和依从性差，而使用受限。在过去的几十年，人们试图设计疫苗剂型既能产生系统免疫又能同时产生黏膜免疫及细胞免疫效应，但在黏膜疫苗佐剂及载体传递系统没有取得突破性进展，特别是在量效控制、缓释靶向性方面的存在技术瓶颈。因此，喷鼻黏膜疫苗佐剂及黏膜疫苗传递系统组合物吸引了人们的目光，并成为该领域发展的重点领域。

近些年的研究表明，以细菌霍乱肠毒素CT、大肠埃希菌不耐热肠毒素LT等毒素类成为具有潜力的黏膜免疫疫苗佐剂，它不仅能产生特异性抗体应答，还可诱导较强的黏膜免疫应答，并有效增强机体抵抗病原感染的能力，但其自身高免疫原性及毒素安全性使得在临床研究中止步不前，特别是其自身蛋白大分子免疫原性强，而把目的抗原所覆盖，由此难以成为候选人用黏膜疫苗佐剂成分。随后的研究，集中在免疫细胞因子具有增强免疫应答，并有一定佐剂效果，但免疫细胞因子庞大而种类复杂，至今还没有确切是哪个，也没有粘附性，且难以单一免疫细胞因子成为稳定有效的黏膜疫苗佐剂的问题。同时有报道，壳聚糖作为一种天然阳离子生物高聚物，因具有生物粘附性、相容性和降解性，而其降解产物无毒、无免疫原性和无致癌性，且壳聚糖具有一定的黏膜疫苗传递载体效应，成为很有前景的疫苗载体。但壳聚糖难溶于水，而易溶于稀酸溶液，这对大多数蛋白、肽类抗原效果欠佳，且使用受到限制。由此，试图发展一种安全、有效、稳定和质量可控制的黏膜疫苗佐剂及传递系统组合物是发展黏膜免疫疫苗的迫切重大需求。

近年的研究表明，以缩水甘油三甲基氯化胺或碘甲烷等化合物与壳聚糖反应可得到季胺化壳聚糖及其衍生物，它与壳聚糖相比具有更好的水溶性、亲水性和阳离子性，极大的适合蛋白、肽类、核酸等生物大分子类抗原，并且利用季铵化壳聚糖本身的阳离子性质，或对其高分子链上的羟基、氨基修饰，通过调节壳聚糖与水分子之间的相互作用，可制备具有不同pH敏感响应性水凝胶，使壳聚糖溶液在宿主体温下发生胶凝，以达到疫苗抗原的长效释放效应。并且季铵盐壳聚糖水凝胶能够与鼻上皮细胞及其粘液层发生强烈作用，以保证在被黏膜纤毛清除之前使疫苗抗原转运通过鼻黏膜，此外还可以通过上皮细胞之间紧密连接处的暂时开放而增加极性蛋白、肽类抗原细胞旁路搬运的能力，实现对疫苗抗原在黏膜传递载体效应和靶向性的作用，从而实现黏膜疫苗载体传递效应。

到目前为止，制备的壳聚糖或季铵盐壳聚糖水凝胶作为黏膜疫苗传递载体系统还存在致命缺点，限制了发展使用。主要表现在：其一是，尽管壳聚糖具有缓慢释放及免疫增强效应，但自身在酸性溶液才可发挥作用，这对于蛋白类、肽类抗原限制了使用；其二是，季铵化壳聚糖水凝胶尽管解决了酸性对蛋白、肽类抗原的影响，多是在体外成形植入或注射体内，限制了季铵盐壳聚糖水凝胶黏膜应用范围；其三是，季铵化壳聚糖水凝胶尽管有一定免疫增效，但远远不能达到疫苗佐剂发挥的作用，还需要其他佐剂的协助；其四是现制备的pH敏感季铵化壳聚糖水凝胶的pH响应性不够敏感，难以迅速响应体内pH微小变化而实现疫苗抗原的间断性释放；其五是疫苗抗原在储备过程中易染菌使其失效或对人体造成其它危害。由此，很有必要研制一种喷鼻黏膜疫苗传递载体与佐剂的组合物，以实现对黏膜感染疾病安全简便、全面有效的免疫预防，实现免疫防控感染性疾病的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种喷鼻黏膜免疫疫苗组合物。

本发明的目的还在于提供一种喷鼻黏膜免疫疫苗组合物制备方法。

本发明的目的也在于提供一种喷鼻黏膜免疫疫苗组合物的在制备免疫预防药物中的应用。