[发明专利]用于检测乙型肝炎病毒的抗药性株系的核酸引物组、测定试剂盒及检测乙型肝炎病毒的抗药性株系的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于检测编码对于抗药性乙型肝炎病毒是特异性的氨基酸序列的核苷酸序列的核酸引物组、测定试剂盒及检测乙型肝炎病毒的抗药性株系的方法。

背景领域

作为治疗HBV患者的方法，存在施用抑制HBV增殖的化学药物例如逆转录酶抑制剂的方法。这样的化学药物通过结合dCTP在DNA复制过程中通常结合的位点(从而展示竞争性抑制逆转录酶在整合dCTP中的功能(work)的作用)和通过在复制过程中被整合入DNA(-)链(从而展示阻止DNA链延伸的作用)来抑制HBV增殖。

然而，已知当长时间施用例如拉米夫定时，可出现在某些氨基酸区域(例如，YMDD区域)具有突变的突变病毒，并且该突变病毒抗拉米夫定，从而引起病毒的量的再增加(“Kanzo”(Liver)，第47卷，No.11，499-502(2006))。因此，当通过监测显示抗药性株系出现时，需要采取紧急对策例如改变药物等。通过使用PCR扩增乙型肝炎病毒(在下文中称为HBV)的DNA，然后通过序列分析阅读编码上述氨基酸突变的核苷酸序列来进行抗药性株系的检测(Int.J.Med.Sci.20052(1))。然而，期望有以更容易的方式检测抗药性株系的方法。

本发明的公开内容

鉴于上述问题，本发明的目的是提供能够在短时间内容易且便宜地检测HBV的抗药性株系的核酸引物组、测定试剂盒及检测乙型肝炎病毒的抗药性株系的方法。

为了实现该目的，本发明提供了检测乙型肝炎病毒的抗药性株系或非抗药性(drug-nonresistant)株系的方法，包括：

使用引物组通过LAMP扩增样品溶液中的乙型肝炎病毒的核酸以产生扩增产物，和

将扩增产物与含有来源于乙型肝炎病毒的抗药性株系的多核苷酸的探针和/或含有来源于乙型肝炎病毒的非抗药性株系的多核苷酸的探针杂交，以检测乙型肝炎病毒的抗药性或非抗药性株系，

其中所述引物组包括FIP引物、F3引物、BIP引物和B3引物，并且至少一个组选自：

引物组1，其中FIP引物由SEQ ID NO：3表示，BIP引物由SEQ ID NO：4表示，F3引物由SEQ ID NO：27表示，以及B3引物由SEQ ID NO：28表示，和

引物组2，其中FIP引物由SEQ ID NO：5表示，BIP引物由SEQ ID NO：6表示，F3引物由SEQ ID NO：29表示，以及B3引物由SEQ ID NO：30表示，

所述引物组用于扩增含有编码乙型肝炎病毒的聚合酶区域中的位点181和204上的氨基酸的核苷酸序列的核苷酸序列区域；

引物组3，其中FIP引物由SEQ ID NO：7表示，BIP引物由SEQ ID NO：8表示，F3引物由SEQ ID NO：31表示，以及B3引物由SEQ ID NO：32表示，

引物组4，其中FIP引物由SEQ ID NO：9表示，BIP引物由SEQ ID NO：10表示，F3引物由SEQ ID NO：31表示，以及B3引物由SEQ ID NO：32表示，

引物组11，其中FIP引物是由SEQ ID NO：7表示的多核苷酸，BIP引物由SEQ ID NO：121表示，F3引物由SEQ ID NO：31表示，以及B3引物由SEQ ID NO：123表示，和

引物组12，其中FIP引物是由SEQ ID NO：9表示的多核苷酸，BIP引物由SEQ ID NO：122表示，F3引物由SEQ ID NO：31表示，以及B3引物由SEQ ID NO：124表示，

所述引物组用于扩增含有编码乙型肝炎病毒的聚合酶区域中的位点204和236上的氨基酸的核苷酸序列的核苷酸序列区域；

引物组5，其中FIP引物是由SEQ ID NO：15表示的多核苷酸，BIP引物由SEQ ID NO：16表示，F3引物由SEQ ID NO：33表示，以及B3引物由SEQ ID NO：34表示，

引物组6，其中FIP引物是由SEQ ID NO：17表示的多核苷酸，BIP引物由SEQ ID NO：18表示，F3引物由SEQ ID NO：35表示，以及B3引物由SEQ ID NO：36表示，

引物组7，其中FIP引物是由SEQ ID NO：19表示的多核苷酸，BIP引物由SEQ ID NO：20表示，F3引物由SEQ ID NO：37表示，以及B3引物由SEQ ID NO：38表示，和