[发明专利]模拟移动床色谱分离提纯槲皮素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然产物的分离提纯方法，特别是槲皮素的模拟移动床色谱分离提纯方法。 

背景技术

槲皮素，化学名称为3,3’,4’,5,7-五羟基黄酮，其化学结构为： 

银杏叶提取物(GBE)主要药用成分为内脂类和黄酮类化合物，黄酮类化合物常以黄酮苷形式存在，黄酮苷水解后可产生具有药理活性的黄酮，银杏黄酮类化合物具有降血脂、扩张冠脉、止血、镇咳祛痰、降低血管脆性等作用；从银杏叶中提取的黄酮类化合物水解后主要含有三种物质，分别是槲皮素、山奈酚和异鼠李素，槲皮素是黄酮类化合物中具有代表性的一种；药理研究发现槲皮素具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗糖尿病并发症等多种生物活性及药理作用，对呼吸道疾病，特别是哮喘病、支气管炎有较好作用。

    目前，国内对银杏叶中有效成分的提取，仅限于黄酮类化合物和内脂类化合物，未对各类化合物中的单一组分进行纯化；本方法用模拟移动床对银杏叶提取物黄酮类化合物中的槲皮素进行纯化，经HPLC检验，纯度达90%以上，这对国内外银杏叶的进一步开发、应用、研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种模拟移动床色谱分离纯化槲皮素的方法。 

本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下： 

模拟移动床色谱分离提纯槲皮素的方法，该方法采用槲皮素粗品为原料，应用三区模拟移动床色谱系统分离提纯，模拟移动床色谱系统由4-12根色谱柱组成；固定相采用十八烷基硅胶键合硅胶，流动相为甲醇与水的混合溶液；切换时间Ts为5-20min；操作温度为20-40℃。用模拟移动床系统分离纯化槲皮素，包括以下步骤：

（1）、将槲皮素粗品溶于流动相中，浓度为：0~50mg/mL；

（2）、用模拟移动床系统分离纯化；

（3）、浓缩、重结晶得到高纯度的槲皮素。

本发明具有以下技术效果：本发明采用模拟移动床系统，制备了高纯度的槲皮素，工艺简单，生产连续自动化，产品质量稳定，溶剂采用甲醇，可回收利用，无污染，实现清洁生产。 

具体实施方式

1、原料溶液的配制 

    将70%的槲皮素粗品溶解于流动相中，沉降，经0.45um滤膜过滤得到浓度为10mg/mL的溶液，作为模拟移动床系统的进样溶液。

2、色谱柱的填装与流动相的组成 

    使用匀浆法填装12根色谱柱，色谱柱规格10mm*250mm，填料为十八烷基硅胶键合相硅胶，粒径为10-20um。经过匀浆法填装后的色谱柱对称性要求一致；

   流动相为甲醇和水的混合溶液，甲醇与水的体积比为7:3。

3、模拟移动床色谱系统及操作参数 

       模拟移动床色谱系统包括洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、单向阀和单片机控制器及计算机组成。洗脱泵流量0-50mL/min，压力0-40Mpa；进样泵流量0-10mL/min，压力0-10Mpa；萃取泵流量0-50mL/min，压力0-40Mpa；色谱柱工作温度20-40℃。模拟移动床色谱系统由12根色谱柱组成，分为三个带：解析带有2根色谱柱，精制带有5根色谱柱；吸附带有5根色谱柱，通过控制系统定时控制电磁阀的开闭，使进样口、流动相进口、萃取液出口和提余液出口沿着流动相的方向定时变换，高纯度的槲皮素产品从萃取液出口获得，杂质从提余液出口出来；

模拟移动床色谱系统具体操作参数为：

流动相：甲醇：水=7:3

进样浓度：10mg/mL

进样液流速：0.1mL/min

洗脱液流速：2.7mL/min

萃取液流速：1.8mL/min

提余液流速：1.0mL/min

切换时间：9min

色谱柱温度：20~40℃

4、成品检验

泵：江苏汉邦科技分析泵

检测器：江苏汉邦科技紫外检测器

检测波长：360nm

流动相：甲醇：水=60:40

流速：1.0mL/min

色谱柱：C18，4.6*250mm  

以下列出两个分离实例： 

分离实例1：

A操作条件

流动相：甲醇:水=7: 3

进样浓度：5mg/mL

进样液流速：0.1mL/min

洗脱液流速：2.7mL/min

萃取液流速：1.8 mL/min