[发明专利]鉴定猪优良肉质基因和/或营养活性物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定影响猪肉质性状的营养活性物质或/和猪肉质调控基因的方法及组合物，特别涉及一种鉴定影响猪肉质性状的营养活性物质或/和调控猪优良肉质的基因的方法，及其由特异组合的细胞模型和肉质关键调控基因的引物对组成的组合物。

背景技术

发展优质高产的养猪业是提高人民生活水平、增强我国猪肉产品在国际市场的竞争力和确保养猪业可持续发展的关键。过去30多年来随着科学技术的发展，我国猪肉供应基本解决了吃肉难的问题。随着人民生活水平的提高，消费者对猪肉风味品质、营养和安全的要求越来越高，养猪业面临着从量变向质变转化的过程。然而，由于养殖业长期以来的努力目标为“高产”，特别是近年来主要以引进洋种猪、规模化饲料养殖为方式的猪肉产量高增长模式，导致了目前国内主要供应猪肉品种品质的显著下降。表现为猪肉主要品质指标明显降低，风味、口感和营养水平下降，不仅引起广大人民的生活质量下降，而且造成了巨大的经济损失。据统计，北京市场上洋种养殖猪肉价格仅为10-15元/500克，而肉质优良的土种猪北京黑猪的价格在25-35元/500克。此外，肉品质低也严重影响了国产猪肉的进出口贸易。因此，提高猪肉品质，成为满足人民日益增长的对优质猪肉的需求、增强我国猪肉产品在国际市场的竞争力和确保养猪业可持续发展的关键。

经过我们的前期研究发现，猪肉的品质性状虽然包括通过很多指标，包括嫩度、肉色、风味、系水力和口感等，但从分子营养学和细胞生物学的角度来看，猪肉的品质主要由肌纤维的发育和肌内脂肪的沉积来决定。在猪的生长和肥育过程中，如果体内脂肪主要沉积到骨骼肌部位的细胞间或细胞内，将形成“大理石纹”或“雪花肉”，明显提高肉的品质；而如果脂肪沉积形成的皮下脂肪、内脏脂肪和腹脂是养猪生产中不想要的“废弃脂肪”。如何在不增加“废弃脂肪”沉积的同时（瘦肉型猪的“废弃脂肪”已很少）增加肌内脂肪是改善肉品质的理论和技术瓶颈。

研究发现，不同部位脂肪沉积和肉质发育生理进程的差异收到内因（基因）和外因（营养）的综合作用和调控。已经报道的能够对体内脂肪沉积和肉质发育发挥调控的功能性基因包括FABP4（脂肪酸结合蛋白）、LIPIN1等，而较为公认的营养物质为甜菜碱等。然而，运用传统方法发现的这些基因和/或饲料添加剂，具有研究周期长、需要大规模动物实验反复验证、不能揭示作用机理和不能发掘综合性效应等缺点，已经不能满足当前猪肉肉质改良的要求。

近年来，随着基因组测序计划的完成和芯片技术的发展，使用猪的Affymetrix（美国Affymetrix公司）寡核苷酸芯片，对不同肉质种猪进行高通量基因筛选的研究为肉质改良提供了新思路。然而，基于芯片技术的方法存在以下缺点：（1）筛选结果多为海量数据，分析困难，无法进行应用推广；（2）其中存在大量假阳性基因，不能对调控肉质的关键基因进行鉴定；（3）不适用与研究调控猪优良肉质的营养活性物质（含饲料添加剂等）。

因此，迫切的需要开发一种新型技术，可用于对芯片筛选方法获得的能够对猪的肉质发育发挥重要作用的功能性基因的鉴定方法，以及适用于对传统方法和多种猪的营养活性物质（含饲料添加剂等）对肉质影响作用进行筛选和鉴定的方法。该技术的创建，将为解决猪的肉质改良问题提供终极对策。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定能够调控猪肉质的营养活性物质或/和功能基因的方法及组合物。

本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定猪营养活性物质或/和猪肉质基因的组合物由3T3-L1细胞、C2C12细胞、特异于AMPK-α基因的引物对1，以及特异于PGC-1α基因的引物对2组成；

所述特异于AMPK-α基因的引物对1由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；所述特异于PGC-1α基因的引物对2由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成。

所述AMPK-α基因的GENBANK登陆号为NM_001013367.3；所述PGC-1α基因的GENBANK登陆号为NM_008904.2。序列1由18个核苷酸组成；序列2由18个核苷酸组成；序列3由18个核苷酸组成；序列4由18个核苷酸组成。

含有上述组合物的试剂盒也属于本发明的保护范围。

上述组合物的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述组合物的制备方法包括将上述组合物中各细胞分别单独包装，以及将各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

上述试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。