[发明专利]鉴定猪优良肉质基因和/或营养活性物质的方法

权利要求书

1.用于鉴定或辅助鉴定猪营养活性物质或/和猪肉质基因的组合物，其特征在于：所述组合物由3T3-L1细胞、C2C12细胞、特异于AMPK-α基因的引物对1，以及特异于PGC-1α基因的引物对2组成；

所述特异于AMPK-α基因的引物对1由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；所述特异于PGC-1α基因的引物对2由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成。

2.含有权利要求1所述组合物的试剂盒。

3.权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将权利要求1所述组合物中各细胞分别单独包装，以及将各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述组合物中各细胞分别单独包装，以及将所述组合物中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内：PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。

5.用权利要求1所述组合物鉴定或辅助鉴定待测物质是否为猪肉质改良的营养活性物质的方法，包括如下步骤：将所述待测物质分别与C2C12细胞和经“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导的3T3-L1细胞共同孵育，检测所述待测物质是否抑制所述经“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导的3T3-L1细胞的成脂分化，检测所述待测物质是否促进所述C2C12细胞的成肌分化；若所述待测物质同时满足如下a）和b）对条件，则所述待测物质为猪肉质改良的营养活性物质或候选为猪肉质改良的营养活性物质，若所述待测物质不同时满足如下a）和b）对条件，则所述待测物质不为猪肉质改良的营养活性物质：

a）所述待测物质抑制所述经“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导的3T3-L1细胞的成脂分化；

b）所述待测物质促进所述C2C12细胞的成肌分化。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：将所述待测物质分别与所述C2C12细胞和所述经“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导的3T3-L1细胞共同孵育后，利用所述引物对1检测所述3T3-L1细胞与所述待测物质孵育后AMPK-α基因相对于所述经“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导的3T3-L1细胞的表达量变化，利用所述引物对2检测所述C2C12细胞与所述待测物质孵育后PGC-1α基因相对于所述C2C12细胞的表达量变化；若所述待测物质同时满足所述a）和b）的条件，以及如下c）和d）的条件，则所述待测物质为猪肉质改良的营养活性物质，若所述待测物质满足所述a）和b）的条件，但不满足如下c）和d）的条件，则所述待测物质候选为猪肉质改良的营养活性物质：

c）和所述经“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导下3T3-L1细胞相比，与所述待测物质孵育后所述3T3-L1细胞中所述AMPK-α基因的表达量降低；

d）和所述C2C12细胞比，与所述待测物质孵育后所述C2C12细胞中所述PGC-1α基因的表达量提高。

7.用权利要求1所述组合物鉴定或辅助鉴定待测基因是否为猪优良肉质基因的方法，包括如下步骤：

（1）将所述待测基因分别导入3T3-L1细胞和C2C12细胞使其表达；

（2）对所述3T3-L1细胞进行“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导；

（3）检测所述待测基因是否抑制所述3T3-L1细胞在“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导下的成脂分化，检测所述待测基因是否促进所述C2C12细胞的成肌分化；

（4）按照如下方法确定所述待测基因是否为猪优良肉质基因：若所述待测基因同时满足如下a）和b）的条件，则所述待测基因为猪优良肉质基因或候选为猪优良肉质基因，若所述待测基因不同时满足如下a）和b）的条件，则所述待测基因不为猪优良肉质基因：

a）所述待测基因抑制所述3T3-L1细胞在所述“IBMX+胰岛素+地塞米松”三联诱导下的成脂分化；

b）所述待测基因促进所述C2C12细胞的成肌分化。