[发明专利]重组质粒pAdTrack-shRNA的测序方法

权利要求书

1.重组质粒pAdTrack-shRNA的测序方法，该方法包括：

在多克隆位点前后设计上游引物M和下游引物N，使上游引物M和下游引物N分别在DNA链上有2个匹配位点，且引物M的2个匹配位点位于多克隆序列的同侧，引物N的2个匹配位点分别位于多克隆序列的两侧；

进行第一次PCR反应，电泳后胶回收含有多克隆位点的目的条带；

以胶回收产物为模板，利用上游引物M和下游引物N进行二次PCR反应，对反应产物进行测序。

2.根据权利要求1所述的重组质粒pAdTrack-shRNA的测序方法，其中，重组质粒的插入片段小于100bp。

3.重组质粒pAdTrack-IL-1β-shRNA的测序方法，该方法包括：

在多克隆位点前后设计上游引物和下游引物：

上游引物SEQ ID No.1：ACCTCTACAAATGTGGTATG

下游引物SEQ ID No.2：TTATGGGACTTTCCTACTTG

进行第一次PCR反应，电泳后胶回收含有多克隆位点的目的条带；

以胶回收产物为模板，利用上游引物SEQ ID No.1和下游引物SEQ ID No.2进行二次PCR反应，对反应产物进行测序。

4.根据权利要求3所述的测序方法，其中，所述第一次PCR反应条件为：94℃预变性45s；94℃变性45s，59.6℃退火45s，72℃延伸1min，共30~35个循环；最后72℃延伸5~10min。

5.根据权利要求3或4所述的测序方法，其中，所述第二次PCR反应条件为：94℃预变性45s；94℃变性45s，59.6℃退火45s，72℃延伸1min，共30~35个循环；最后72℃延伸5~10min。

6.一种用于实现权利要求3~5任一项所述重组质粒pAdTrack-shRNA的测序方法的引物对SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。