[发明专利]具有基因药物程序性释放性能的金纳米球壳载体及制备方法

权利要求书

1.制备具有基因药物时序性释放性能的金纳米球壳结构载体，其特征是金纳米球壳内部空腔结构载药，药物通过脉冲激光激发释放，球壳外面接阳离子聚合物来负载带负电的基因，在细胞中自行释放。

2.如权利要求1所述载体，其特征是用来负载基因的阳离子聚合物是聚组氨酸，分子量大于5000。

3.如权利要求1所述载体，其特征是用来负载的基因为20-100个碱基的RNA。

4.构建权利要求1的具有基因药物时序性释放性能的金纳米球壳结构的方法，其特征是步骤如下：

a.将总物质的量为0.5-1.5umol的二肉豆蔻酰磷脂酸和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱按照1:1的比例溶解在1mL氯仿和甲醇的混合溶液中，在脂质体形成过程中加入亲水性的药物盐酸阿霉素，使得盐酸阿霉素的浓度为30nM，加入1-1.5mg的阳离子聚合物聚组氨酸或者聚赖氨酸，加入10-15uL质量分数为1%的氯金酸溶液和20-30uL浓度为20mM的盐酸羟胺，形成载药的金纳米球壳结构；

b.用1mmol的Traut’s试剂与1-2mg聚组氨酸反应，修饰出巯基，利用巯基与金的反应，将反应后的聚组氨酸加入0.5-1.5mL的金纳米球壳溶液中，聚组氨酸的侧基咪唑基带正电，而基因带负电，因此分别将2倍，8倍，16倍，32倍，64倍载药的金纳米球壳溶液与等量as-micro-RNA-21或者Danio rerio microRNA 146b-1溶液混合时，可以得到复合物。

5.如权利要求4所述的方法，其特征是所述的步骤a为：

在600mL浓度为0.2mM硝酸银溶液中加入0.6-1mL浓度为1.0M硼氢化钠和0.5mM柠檬酸钠水溶液，将溶液搅拌均匀，再往溶液里加入0.6-1mL的2.0M盐酸羟胺和1.5mL的0.1M的硝酸银溶液，搅拌过夜，形成比较大的银颗粒。快速将3.8-5mL浓度为25mM的氯金酸溶液和银纳米粒子混合，得到金纳米球孔洞结构，将溶液避光保存一星期。将上述得到的溶液用20000分子量的透析卡在1500mL的500uM的柠檬酸钠缓冲溶液（pH=5.5）中透析提纯，得到金纳米球孔洞结构的溶液。然后加入盐酸阿霉素，使得溶液中盐酸阿霉素浓度为40-60nM，加入三乙胺，使得溶液中三乙胺的浓度为40-60nM，形成载药的金纳米孔洞结构。