[发明专利]血小板形态扫描成像和血小板活化功能评估的方法

权利要求书

1.一种血小板形态扫描成像的方法，其特征是包括如下步骤：

（1）血小板样品的制备

取2毫升静脉血放入柠檬酸钠抗凝管中，离心后得到富血小板血浆；取200μL所述富血小板血浆放置于涂覆有200μL浓度为2mg/mL的纤维蛋白原的35mm细胞培养皿中室温下孵育20-30分钟，用PBS缓冲液洗脱未粘附在所述细胞培养皿底部的血小板后，加入1.5-2mLPBS缓冲液后备用；

（2）将连接在扫描离子电导显微镜的Ag/AgCl参比电极放置在步骤（1）获得的细胞培养皿中；将连接在扫描离子电导显微镜的探测电极放置在步骤（1）获得的细胞培养皿中，所述探测电极是一设置在充灌有PBS缓冲液的纳米吸管内的Ag/AgCl电极；

（3）用扫描离子电导显微镜监控流入探测电极电流的变化，通过负反馈控制使得跳跃的探测电极与血小板间保持设定的距离，记录下所述探测电极的位置，通过计算机绘制得到血小板表面形貌的三维拓扑结构图。

2.一种血小板活化功能评估方法，其特征是包括如下步骤：

（1）血小板样品的制备

取2毫升静脉血放入柠檬酸钠抗凝管中，离心后得到富血小板血浆；取200μL所述富血小板血浆放置于涂覆有200μL浓度为2mg/mL纤维蛋白原的35mm细胞培养皿中室温下孵育20-30分钟，用PBS缓冲液洗脱未粘附在所述细胞培养皿底部的血小板后，加入1.5-2mLPBS缓冲液后备用；

（2）将连接在扫描离子电导显微镜的Ag/AgCl参比电极放置在步骤（1）获得的细胞培养皿中；将连接在扫描离子电导显微镜的探测电极放置在步骤（1）获得的细胞培养皿中，所述探测电极是一设置在充灌有PBS缓冲液的纳米吸管内的Ag/AgCl电极；

（3）用扫描离子电导显微镜监控流入探测电极电流的变化，通过负反馈控制使得跳跃的探测电极与血小板间保持设定的距离，记录下所述探测电极的位置，通过计算机绘制得到血小板表面形貌的三维拓扑结构图；

（4）再向细胞培养皿中加入激活剂，作用10-20分钟，通过计算机绘制得到加入所述激活剂10-20分钟血小板表面形貌的三维拓扑结构图。

3.根据权利要求2所述的一种血小板活化功能评估方法，其特征是所述激活剂为凝血酶或ADP,所述凝血酶的加入量是使凝血酶的终浓度为2U/mL,所述ADP的加入量是使ADP的终浓度为5μM。