[发明专利]绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒及制备、使用方法

权利要求书

1.一种绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：其原料配方为：1000~2000μL反应液，100~200μL Bst DNA聚合酶，50~100μL阳性对照，50~100μL阴性对照，1mL-2 mL液体石蜡，1mL-2 mL超纯水。

2.根据权利要求1所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：反应液包括内引物混合液、外引物混合液、LAMP反应缓冲液、Mg²⁺及dNTP，五种液体于反应液中体积比为2:2:2.5:2:1。

3.根据权利要求2所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：内引物与外引物为针对Mycoplasma ovipneumoniae 16S rRNA基因的环介导等温扩增试验特异性内引物FIP与BIP、外引物F3与B3，内引物浓度为20μmol/ L，外引物浓度为5μmol/ L，引物序列见表1：

表1 内外引物序列

引物序列（5’—3’）FIPACTTCATCCTGCACTCTGTGTCTTTT CAGCAGTAAGGAATATTCCACABIPTTAGGGATGTAAACTGCTGTTGTTTT CCGTCAAGACTAAATCATTTCCF3ATTGAGATACGGCCCAGAB3GCCGTCACTTTCTAATAAGGT

。

4.根据权利要求2所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：LAMP反应缓冲液为10×ThermoPol Reaction Buffer，该LAMP反应缓冲液包括200mmol/L Tris-HCl、100mmol/L（NH₄）₂SO₄、100mmol/L KCl、20mmol/L MgSO₄和1%Triton X-100。

5.根据权利要求2所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：Mg²⁺为MgCl₂溶液，其浓度为25mmol/L。

6.根据权利要求2所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：dNTP为dATP、dGTP、dTTP、dCTP和dUTP在内等量混合游离核苷酸，其浓度为10mmol/ L。

7.根据权利要求1所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：Bst DNA聚合酶浓度为8.0U/μL。

8.根据权利要求1所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：阳性对照为绵羊肺炎支原体16S rRNA基因部分序列克隆质粒，其浓度为1.0×10⁵copies/μL。

9.根据权利要求1所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：阴性对照为不含绵羊肺炎支原体16S rRNA基因的pMD18-T空载体质粒。

10.根据权利要求1所述的绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：液体石蜡为分析纯石蜡油。