[发明专利]一种肠道病毒71型(EV71)实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

权利要求书

1.一种肠道病毒71型(EV71)的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，包含有一条可与如序列表中序列1所示的肠道病毒71型(EV71)的靶标核酸(EV71 RNA)序列特异结合的捕获探针，一对用于在M-MLV反转录酶作用下产生EV71靶标核酸(EV71RNA)的DNA拷贝的EV71扩增引物T7和nT7，和一条用于与在T7 RNA聚合酶作用下根据所述EV71靶标核酸(EN71 RNA)的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的EV71检测探针。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于：所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述EV71扩增引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物序列如序列表中序列3所示，nT7引物序列如序列表中序列4所示；所述EV71检测探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含有M-MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶，所述M-MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶存在于一SAT酶液中，所述捕获探针存在于一核酸提取液中，所述T7引物、nT7引物和EV71检测探针存在于一EV71检测液中。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含有EV71内标和内标检测探针；所述EV71内标为竞争性内标，可与捕获探针特异性结合，并与EV71靶标核苷酸(EV71 RNA)使用同一对引物(T7和nT7)，EV71内标由序列表中序列7所示的EV71 IC RNA；所述内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团，且所述内标检测探针存在于EV71检测液中。

5.根据权利要求1至4任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含裂解液、核酸提取液、洗涤液、EV71反应液、EV71检测液、SAT酶液、EV71阳性对照、EV71阴性对照和EV71内标，其中：

裂解液：含硫酸铵((NH₄)₂SO₄)和HEPES；

核酸提取液：含捕获探针和磁珠；

洗涤液：含NaCl和SDS。

EV71反应液：含dNTP和NTP；

EV71检测液：含T7引物、nT7引物、EV71检测探针和内标检测探针；

SAT酶液：含M-MLV反转录酶、T7RNA聚合酶；

EV71阳性对照；含肠道病毒71型(EV71)VP1基因的体外转录RNA稀释物；

EV71阴性对照：不含有肠道病毒71型(EV71)靶标核酸(EV71 RNA)序列或不含有肠道病毒71型的溶液，如生理盐水；

EV71内标：含EV71内标RNA(EV71 IC RNA，序列如序列表中序列7所示)稀释物。