[发明专利]MTRR基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种MTRR基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

甲硫氨酸合成酶还原酶(5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase，MTRR)，MTRR基因定位于人类5号常染色体的短臂上(5P15.2～15.3)，该基因包含15个外显子和14个内含子。MTRR基因的A66G突变是目前最主要也是研究最多的突变位点，A66G位点多态性与脊柱裂的发生相关，会影响同型半胱氨酸浓度和叶酸代谢，通过检测该基因，可以预测夫妇未来子代是否有发生神经管畸形的可能，预测血管紧张素转换酶抑制剂类药物的作用效果。此外，MTRR基因的G28905A、C1783T、A1049G、C1243T和C1349G位点突变也不同程度地与乳腺癌、胰腺癌等的发生和发展风险相关，而且可预测血管紧张素转换酶抑制剂类药物的作用效果。

目前，MTRR基因突变检测方法主要有：PCR-RFLP、直接测序法和荧光定量PCR技术，PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。而其它以PCR为基础的检测技术，如直接测序法和荧光定量PCR技术，则存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供MTRR基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测MTRR基因六种常见基因型G28905A、C1783T、A66G、A1049G、C1243T和C1349G的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下：

一种MTRR基因突变检测液相芯片，包括有：

(A).针对MTRR基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对G28905A位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14；针对C1783T位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；针对A66G位点的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18；针对A1049G位点的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；针对C1243T位点的SEQ ID NO.21及SEQ ID NO.22；和/或针对C1349G位点的SEQ ID NO.23及SEQ ID NO.24；所述t ag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12；

(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant i-tag序列选自SEQ ID NO.25～SEQ ID NO.36，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；

(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

在其中的一些实施例中，所述扩增引物为：针对G28905A位点的SEQ ID NO.37及SEQ ID NO.38；针对C1783T位点的SEQ ID NO.39及SEQ ID NO.40；针对A66G位点的SEQ ID NO.41及SEQ ID NO.42；针对A1049G位点的SEQ ID NO.43及SEQ ID NO.44；针对C1243T位点的SEQ ID NO.45及SEQ ID NO.46；和/或针对C1349G位点的SEQ ID NO.47及SEQ ID NO.48。