[发明专利]凹叶厚朴带芽茎段愈伤组织的诱导培养基及其诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物愈伤组织的诱导培养基及使用方法，尤其是一种凹叶厚朴带芽茎段愈伤组织的诱导培养基及其诱导方法。

背景技术

愈伤组织：本是指植物在受伤后于伤口表面形成的一团薄壁细胞。在组织培养中是指外植体在离体培养条件下，形成一团没有分化、又能旺盛分裂的薄壁细胞团，是组织培养过程中经常出现的一种组织状态。凹叶厚朴（拉丁名为Magnolia officinalis Rehd．et Wils．var．bilob aRehd．et Wils）的愈伤组织中提取的厚朴酚具有很好的药用价值，许多科学研究也需要广泛使用其愈伤组织，因此如果高效的获得凹叶厚朴的愈伤组织是当前需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的是：提供一种凹叶厚朴带芽茎段愈伤组织的诱导培养基及其诱导方法，它对凹叶厚朴带芽茎段的愈伤组织的生长具有高诱导率，而且增长明显迅速，生长质量好，以克服现有技术的不足。

本发明是这样实现的：凹叶厚朴带芽茎段愈伤组织的诱导培养基，它包括基础培养基、1.5～4.5mg/L的6-BA、1.0～3.0mg/L的NAA、0～1.0mg/L的2，4-D、20～30g/L的蔗糖及6.5g/L的琼脂；PH值为5.8。

所述的基础培养基为WPM培养基、B5培养基或1/2MS培养基。

更优选的方案是，它包括B5培养基、4.5mg/L的6-BA、1.0mg/L的NAA、0.5mg/L的2，4-D、20 g/L的蔗糖及6.5g/L的琼脂；PH值为5.8。

凹叶厚朴带芽茎段愈伤组织的诱导培养基的诱导方法，先将外植体进行预处理，选择生长健壮、无病虫害的凹叶厚朴带芽茎段，将其修剪好，并用水冲洗干净后放入盛有洗衣粉水的锥形瓶中浸泡10min，浸泡过程中不断晃动锥形瓶，使外植体与洗衣粉水充分接触；再用流水冲洗3h，剥去芽体的2层外苞片，将茎段切口处纵向剪口后放入0.1 g/L的VC溶液中浸泡0.5h后作灭菌处理；将预处理过的外植体置于无菌培养瓶中，用75%酒精灭菌30s，再用质量百分比为0.1%的HgCl₂溶液灭菌10min，然后用无菌水冲洗5次，保持灭菌和冲洗过程中进行搅动，消毒后剥去芽的外苞片2～3层后斜插到已灭菌的愈伤组织诱导培养基中。

为了进一步验证本发明的效果，按不同方案配制出愈伤组织诱导培养基：试验方法采用不同的培养基、激素种类和浓度进行正交试验L₉(3⁴)，正交设计的因素水平表见表1，实验设计表见表2，实验结果见表3。

WPM培养基及B5培养基的蔗糖均为20 g/L，1/2MS培养基（本发明中1/2MS培养基是指MS培养基中所有元素减半）的蔗糖为30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度1500~2000lux。每个处理10瓶，每瓶3个外植体，实验重复3次，观察记录。接种后25 d统计愈伤组织的诱导率。

表1 正交设计因素水平表

表2愈伤组织的诱导试验设计L₉(3⁴)